惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)屬于假單胞菌屬,為革蘭氏陰性桿菌。有些菌株為卵圓形,單端叢毛菌,運(yùn)動(dòng)活潑。惡臭假單胞為專性需氧菌,廣泛存在于土壤和水中。
在GB 8538-2022《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》銅綠假單胞檢測(cè)項(xiàng)目中,要求定期使用惡臭假單胞菌作為陰性對(duì)照菌對(duì)整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。
今天我們就通過(guò)實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹一下惡臭假單胞的菌株活化及生化特性等。
一、惡臭假單胞菌菌株活化
菌株活化一定要選擇合適的培養(yǎng)條件才能夠保證微生物的生長(zhǎng)?!恫芗?xì)菌鑒定手冊(cè)》中表明惡臭假單胞菌最適生長(zhǎng)溫度為25℃-30℃。ATCC(美國(guó)菌種保藏中心)給出的菌株活化說(shuō)明中,培養(yǎng)溫度為30℃;CICC(中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心)菌種說(shuō)明中要求培養(yǎng)溫度為28℃。
我們將菌株接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和BHI(腦心浸液培養(yǎng)基)中分別置于36℃和28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),惡臭假單胞菌在36℃也可以生長(zhǎng),但比28℃生長(zhǎng)弱一些。所以在菌株活化時(shí),為保證菌株良好生長(zhǎng)建議25℃-30℃進(jìn)行培養(yǎng)。
二、惡臭假單胞菌的生物學(xué)特性
在GB 8538-2022《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》銅綠假單胞檢測(cè)項(xiàng)目中,惡臭假單胞菌為陰性對(duì)照菌,銅綠假單胞菌為陽(yáng)性對(duì)照菌。那么惡臭假單胞菌生物學(xué)特性是什么?與銅綠假單胞菌又有何區(qū)別?我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象來(lái)進(jìn)行了解。
1)假單胞CN瓊脂
將活化好的菌株接種假單胞CN瓊脂,36℃培養(yǎng)24h。平板上銅綠假單胞為藍(lán)綠色菌落,而惡臭假單胞為無(wú)色菌落。將平板置于366nm紫外燈下觀察熒光,銅綠假單胞有熒光,惡臭假單胞無(wú)明顯熒光。
2)綠膿菌素測(cè)試
將菌株接種到綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基上,36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h,加入三氯甲烷3mL~5mL,可搗碎培養(yǎng)基并充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷,待三氯甲烷提取液呈藍(lán)色時(shí),用吸管將三氯甲烷移到另一試管中,并加入1mol/L的鹽酸1mL,振蕩后,靜置片刻。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時(shí)為陽(yáng)性。
銅綠假單胞菌綠膿菌素實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性,惡臭假單胞菌為陰性。
3)產(chǎn)胺實(shí)驗(yàn)
將菌株接種至乙酰胺液體培養(yǎng)基中,在36℃±1℃下培養(yǎng)20h~24h。然后向每支試管培養(yǎng)物加入1滴~2滴鈉氏試劑,10s內(nèi)檢查各試管的顏色變化,如表現(xiàn)出從黃色到磚紅色的顏色變化,則為陽(yáng)性結(jié)果,否則為陰性。
銅綠假單胞菌產(chǎn)胺實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性,惡臭假單胞菌為陰性。
4)42℃生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)
將菌株接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上或者42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)生化管中,42℃±1℃ 培養(yǎng)24h~48h,能生長(zhǎng)為陽(yáng)性結(jié)果,否則為陰性。
銅綠假單胞菌42℃生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性,惡臭假單胞為陰性。
5)氧化酶實(shí)驗(yàn)
?。驳巍车涡迈r配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。?將菌株純培養(yǎng)物涂布在預(yù)備好的濾紙上。在10s內(nèi)顯深藍(lán)紫色的視為陽(yáng)性反應(yīng)。?
銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌氧化酶實(shí)驗(yàn)均為陽(yáng)性。
6)金氏B培養(yǎng)基產(chǎn)熒光實(shí)驗(yàn)
將菌株接種于金氏B培養(yǎng)基36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)1d~5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光,將5d內(nèi)產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽(yáng)性。
銅綠假單胞菌產(chǎn)生熒光為陽(yáng)性,惡臭假單胞菌不產(chǎn)熒光為陰性。
綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)以及主要生化反應(yīng)結(jié)果匯總?cè)缦拢?/span>
參考文獻(xiàn):
1、GB 8538-2022《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》
2、《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》【M】,科學(xué)出版社,布坎南(R.E.Buchanan)等編,1984
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