你是否有這樣的疑問(wèn)，新購(gòu)入的培養(yǎng)基，如何進(jìn)行技術(shù)性驗(yàn)收來(lái)保證我們?nèi)粘z測(cè)的結(jié)果？
答案是：根據(jù)GB4789.28-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》來(lái)對(duì)培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行驗(yàn)收。該標(biāo)準(zhǔn)涉及到非常多的培養(yǎng)基和試劑類別，今天先給大家介紹一下固體培養(yǎng)基的性能測(cè)試方法。
固體培養(yǎng)基的性能測(cè)試方法主要有兩種：半定量和定量方法，其中，定量測(cè)試方法在GB4789.28新標(biāo)準(zhǔn)的征求意見(jiàn)稿中成為了主要測(cè)試方法，這次我們以平板計(jì)數(shù)瓊脂PCA為例，為大家介紹非選擇性固體培養(yǎng)基性能測(cè)試方法的操作及注意事項(xiàng)。
一、定量測(cè)試方法
1、操作步驟
1.1?根據(jù)培養(yǎng)基名稱查附錄D，獲得質(zhì)控菌株、質(zhì)控指標(biāo)和評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)信息；
1.2 將質(zhì)控菌株接種到對(duì)應(yīng)的非選擇性肉湯中培養(yǎng)過(guò)夜；
1.3?將菌懸液濃度調(diào)整到每平板接種水平為20 CFU～200 CFU；
1.4 準(zhǔn)備待測(cè)培養(yǎng)基平板，將菌液涂布于待測(cè)培養(yǎng)基上，同時(shí)涂布參比培養(yǎng)基①；（也可用傾注法或螺旋涂布法操作）
1.5 培養(yǎng)后，計(jì)算參比培養(yǎng)基、待測(cè)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，計(jì)算生長(zhǎng)率②，再與附錄D評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比判斷。
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注：①參比培養(yǎng)基：一般細(xì)菌采用TSA，霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖瓊脂，對(duì)營(yíng)養(yǎng)有特殊要求的微生物采用適合其生長(zhǎng)的不含抑菌劑或抗生素的培養(yǎng)基。
②生長(zhǎng)率PR：待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)除以參比培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)得出的數(shù)值。
2、注意事項(xiàng)
在整個(gè)操作過(guò)程中，步驟1.3菌懸液濃度調(diào)整為難點(diǎn)，今天將分享一下菌懸液調(diào)整的方法：
2.1 培養(yǎng)后的新鮮菌液可先估計(jì)濃度，如：常見(jiàn)的大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)后原始菌液濃度可達(dá)到1*10^8CFU/mL以上，枯草芽孢桿菌培養(yǎng)后可達(dá)到1*10^6CFU/mL以上；
2.2 再根據(jù)所需菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，稀釋時(shí)可以采用10倍梯度稀釋法。
新鮮菌液濃度估算方法：因每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的菌株活性和選擇的復(fù)活的培養(yǎng)基等不同，原始濃度會(huì)存在一些差異，建議先做菌濃度的預(yù)估實(shí)驗(yàn)。如常見(jiàn)的大腸埃希氏菌ATCC25922接種到BHI過(guò)夜培養(yǎng)后菌液濃度約為10^8CFU/mL，對(duì)菌液進(jìn)行梯度稀釋后，選擇10-6?、10-7兩個(gè)稀釋度進(jìn)行計(jì)數(shù)，通過(guò)計(jì)算結(jié)果可得出新鮮菌液的濃度。以此數(shù)據(jù)作為該菌的原始濃度值。
二、半定量測(cè)試方法
1、操作步驟
1.1 查附錄E，獲得質(zhì)控菌株、質(zhì)控指標(biāo)和評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)信息；
1.2 將質(zhì)控菌株接種到對(duì)應(yīng)的非選擇性肉湯中培養(yǎng)過(guò)夜；
1.3 用1μL接種環(huán)進(jìn)行平板劃線（如下圖所示）
1.4 培養(yǎng)后，評(píng)價(jià)菌落的形狀、大小和生長(zhǎng)密度，并計(jì)算生長(zhǎng)指數(shù)G。
2、注意事項(xiàng)
使用1微升接種環(huán)（購(gòu)買成品接種環(huán)），自己制作的接種環(huán)無(wú)法保證準(zhǔn)確的接種量。
接種前菌液適度混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡，影響接種量。
接種環(huán)浸入培養(yǎng)基液面下1cm左右，沾一滿環(huán)接種物，避免沾取表層氣泡。
接種環(huán)與瓊脂平板表面角度適宜，一般為20°-30°。
劃線時(shí)力度與速度適宜，前后均勻并且連續(xù)。
可制作16條線模板置于平板底部，便于操作。
每個(gè)菌種接種2個(gè)平板，取平均值。
測(cè)試片的質(zhì)控方法
在新發(fā)布的GB4789.2-2022《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》中，新增了測(cè)試片方法，在使用測(cè)試片時(shí)，應(yīng)如何對(duì)其進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收呢？
微生物測(cè)試片是一種特殊的培養(yǎng)基，它是以紙片、冷水可凝膠或無(wú)紡布等作為培養(yǎng)基的載體，用來(lái)檢測(cè)食品中的微生物，考慮到其形式的特殊性，建議采用定量測(cè)試方法。
如果想了解到更多其他培養(yǎng)基驗(yàn)收方法，可關(guān)注“北京陸橋”公眾號(hào)。
