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陸橋公益直播課《2022版國標(biāo)食品中葉酸和維生素B12微孔板法測定解析》問題解答

發(fā)布時(shí)間: 2022-11-21

? ? ? ?感謝各位老師參與11月17日的陸橋公益直播課《2022版國標(biāo)食品中葉酸和維生素B12微孔板法測定解析》,如您未能及時(shí)聆聽,我們已設(shè)置回放,有效期一周(至2022年11月27日) 。

? ? ? ?期待您再次參與陸橋的直播課。



直播課問題解答


1.?葉酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作幾平行?

根據(jù)2022版國標(biāo)最新要求,葉酸是2-3平行,維生素B12是3平行。


2.?標(biāo)準(zhǔn)系列管怎么混勻?

標(biāo)準(zhǔn)系列管各組成溶液添加完畢后,用渦旋振蕩器混勻。


3.?試管法有試劑盒嗎?

有試管即用型試劑盒,分別是葉酸(GVT1001)、維生素B12(GVT1002)、生物素(GVT1003)和泛酸(GVT1004)。


4.?容量瓶需要定期檢定嗎?

需要,GB/T 27405-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范?食品微生物檢測》標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定需要對定容設(shè)備定期檢查以確保其準(zhǔn)確度。


5.?有時(shí)強(qiáng)化食品生產(chǎn)企業(yè)會(huì)在標(biāo)注量上故意多添加一些,這種情況下該如何估算?

第一次做此類樣品只能預(yù)估含量,適當(dāng)多選幾個(gè)稀釋倍數(shù)。后續(xù)有經(jīng)驗(yàn)了,可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)估含量。


6.?標(biāo)準(zhǔn)系列管最后高濃度的幾個(gè)點(diǎn)不穩(wěn)定有什么可能的原因?

原因較多,可以重點(diǎn)看標(biāo)品配制的準(zhǔn)確性和添加的準(zhǔn)確性,特別是移液槍的準(zhǔn)確度。


7.?請問您用試管的多管法紫外分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)曲線選幾次曲線?國標(biāo)里面沒有明確規(guī)定,也沒有對線性做明確要求。

國標(biāo)對標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式?jīng)]有明確要求,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部統(tǒng)一即可。我們一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合。


8.?國標(biāo)法葉酸培養(yǎng)基滅菌以多少毫升為宜?以前做過會(huì)發(fā)生褐變。

培養(yǎng)基用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品數(shù)量來定,一般滅菌后要及時(shí)從高壓鍋中取出,立刻降溫,避免過度加熱。


9.?按含量選擇稀釋倍數(shù)但是還是超標(biāo)曲,為什么呢?

一般是因?yàn)闃悠返膶?shí)際含量高于樣品標(biāo)簽值,建議按經(jīng)驗(yàn)含量值預(yù)估稀釋倍數(shù)。


10.?玻璃器具浸泡可以只用洗滌劑浸泡嗎,需要浸泡多久?

2022版國標(biāo)上明確寫可以用鹽酸或月桂基磺酸鈉洗滌劑浸泡,但未明確浸泡時(shí)間。2014版國標(biāo)上要求鹽酸浸泡2小時(shí)。我們目前還是浸泡2小時(shí)。


11.?鹽酸浸泡,鹽酸濃度有要求不?

國標(biāo)上試劑配制里有寫,例如葉酸在國標(biāo)3.2.5條款中要求“量取100mL鹽酸(濃度36%-38%)與50倍水混合”。


12.?培養(yǎng)基用什么盛裝滅菌?如何混勻?

用三角瓶就可以,滅菌前通過玻璃棒攪拌或浸泡方式充分溶解。


13.?曲線達(dá)到多少算合格呢?

國標(biāo)上沒有明確要求。我們自己一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合,R2值一般0.99常見,最低要求0.97。


14.?酶解法,如何進(jìn)行預(yù)估比較合理?

酶解法處理的是原生樣品,可查閱相關(guān)資料獲取含量范圍或通過預(yù)實(shí)驗(yàn)先摸索含量。


15.?標(biāo)準(zhǔn)曲線需要0.999嗎?

維生素實(shí)驗(yàn)3個(gè)9很難實(shí)現(xiàn)。我們自己一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合,R2值一般0.99常見,最低要求0.97。


16.?維生素B12國標(biāo)方法計(jì)算公式能麻煩講解一下么?

維生素B12國標(biāo)計(jì)算公式中只有一個(gè)f,沒有像葉酸一樣寫明是V×f,所以維生素B12的f實(shí)際就是V和f的乘積結(jié)果。


17.?5mL不含葉酸的標(biāo)準(zhǔn)工作液是什么?

應(yīng)該是5mL不加葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液的無菌葉酸測定培養(yǎng)基,其實(shí)就是葉酸測定培養(yǎng)基。


18.?曲線為什么會(huì)飄點(diǎn)呢?

要結(jié)合具體數(shù)據(jù)才能分析,一般來說與標(biāo)品配制的溶解和添加準(zhǔn)確性有關(guān)系。


19.?維生素B12過濾的樣品用都過濾完嗎?

不需要,只要過濾出需要的量就可以了。


20.?微孔法數(shù)據(jù)處理是我們蝴蝶軟件嗎?怎么用的呢?

Excel和蝴蝶軟件都可以,蝴蝶軟件用法不變,只有稀釋度那里需要根據(jù)實(shí)際稀釋倍數(shù)進(jìn)行調(diào)整換算。


21.?更新版的陸橋維生素B12培養(yǎng)基顏色方面有改進(jìn)嗎?

2022版國標(biāo)對培養(yǎng)基成分沒有調(diào)整,所以我們培養(yǎng)基配方不會(huì)改變,還是與國標(biāo)保持一致。


22.?葉酸計(jì)算公式C0?是接種空白嗎?一定要扣除零點(diǎn)嗎?國標(biāo)里的公式?jīng)]有明確標(biāo)注要扣零點(diǎn)。

C0?是酶解法公式中的參數(shù),是酶空白測定的值。一般常用的直接提取法是不會(huì)用到這個(gè)參數(shù)的。


23.?萊士曼氏乳桿菌不太穩(wěn)定,有什么好的保存方法?

我們實(shí)驗(yàn)室菌株長期保藏用-80度甘油法,一個(gè)月內(nèi)保藏放2-8℃冰箱,葉酸和生物素的菌株可以平板直接放入冰箱,維生素B12?的萊士曼乳桿菌需穿刺培養(yǎng)后,放入冰箱。


24.?同樣的培養(yǎng)基,同樣的菌株活化方法,維生素B12國標(biāo)法長但微孔板不長是什么原因呢?

微孔板法的培養(yǎng)體系是300μl,遠(yuǎn)小于試管法的10mL。所以對標(biāo)準(zhǔn)品的混勻程度,菌活力、濃度及菌的混勻程度,各級(jí)溶液的混勻,移液槍的準(zhǔn)確度都有更高的要求。建議從這些方面排查原因。


25.?新版維生素B12國標(biāo)方法的計(jì)算公式單位最后怎么換算成μg/100g?

公式中有換算系數(shù),按公式計(jì)算后單位即為μg/100g。




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(回放截止到2022年11月27日)


陸橋公益直播課《2022版國標(biāo)食品中葉酸和維生素B12微孔板法測定解析》問題解答


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