滅菌,既是微生物測試的基礎(chǔ),也是無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的核心工藝環(huán)節(jié),其效果驗證十分重要!
我們常用的濕熱滅菌,其效果驗證主要由物理確認和生物學確認兩部分構(gòu)成。
生物學確認則主要是微生物挑戰(zhàn)試驗,該實驗是將一定量、已知特性值的耐熱芽孢(即生物指示劑)在設(shè)定的濕熱滅菌條件下進行滅菌,以驗證設(shè)定的滅菌工藝是否確實能使產(chǎn)品達到預定的無菌保證水平。
最終生物指示劑被殺滅的程度,是評價一個滅菌程序有效性的直觀指標。
今天我們就給大家簡單介紹一下生物指示劑。
01.生物指示劑的定義
一種對特定滅菌程序有確定及穩(wěn)定耐受性的特殊活微生物制成品,可用于滅菌設(shè)備的性能確認,特定物品的滅菌工藝研發(fā)、建立、驗證,生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控 ,也可用于隔離系統(tǒng)和無菌潔凈室除菌效果的驗證評估等。(——源自《中華人民共和國藥典2020年版 四部》中的1421 滅菌法、9207滅菌用生物指示劑指導原則)
02.生物指示劑的分類及選擇
生物指示劑主要分為三大類:
1、載體型生物指示劑:
由微生物芽孢和載體經(jīng)包裝而成;
2、芽孢懸液生物指示劑:
芽孢混懸于液體中;
3、自含式生物指示劑:
芽孢和能夠恢復微生物生長的培養(yǎng)基系統(tǒng)組成。
芽孢懸液生物指示劑,例如安瓿式生物指示劑,主要用于濕熱滅菌的液體滅菌驗證,置于液體中進行使用。
自含式生物指示劑主要用于濕熱滅菌中飽和蒸汽滅菌的驗證,需與被滅菌物品—起置于滅菌艙內(nèi)進行使用。例如,檢測實驗室常用手提式或立式的蒸汽高壓滅菌鍋對培養(yǎng)基、試劑及實驗用具進行滅菌,其滅菌效果需定期使用自含式生物指示劑進行驗證。
安瓿式生物指示劑
03.生物指示劑的用法
使用方法
01
將生物指示劑數(shù)支分別放在滅菌器內(nèi)不易被滅菌完全的位置;
02
按規(guī)定的滅菌溫度(例如121℃±1℃)和時間(例如15min)進行滅菌處理;
03
滅菌完畢,將生物指示劑取出,冷卻至室溫;
04
培養(yǎng)及結(jié)果觀察:
安瓿式生物指示劑:
將生物指示劑垂直放入56℃±1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),同時取一支未經(jīng)滅菌的指示劑,同步放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)作為陽性對照管,同時培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果。
自含式生物指示劑:
垂直擠壓塑料管壓破管內(nèi)的玻璃管(內(nèi)裝紫色液體培養(yǎng)基),使菌片完全浸沒在培養(yǎng)基中;
將生物指示劑垂直放入56℃±1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),同時取一支未經(jīng)滅菌的指示劑,同上處理,同步放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)作為陽性對照管,同時培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果。
滅菌效果判定
A.?培養(yǎng)后當生物指示劑管內(nèi)培養(yǎng)液由紫色變?yōu)?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; font-size: 16px; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">黃色,即表示有菌生長,判定滅菌不合格;
B.?培養(yǎng)后當生物指示劑管內(nèi)仍為紫色表示無菌生長,陽性對照培養(yǎng)液由紫色變?yōu)?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">黃色,判定為滅菌合格。
04.生物指示劑的性能指標
生物指示劑主要性能指標為:菌種及其純度、總孢子數(shù)、D值、存活時間、殺滅時間。
●?總孢子數(shù):生物指示劑芽孢含量應在90%以上,濕熱滅菌生物指示劑的芽孢數(shù)范圍一般在1.0×105?5.0×106CFU。(依據(jù)中國藥典2020版四部9208進行檢測)
●?D值:即微生物的耐熱參數(shù),是指一定溫度下,將試驗微生物殺滅90%所需的滅菌時間或滅菌劑量。
▲一般以時間(分)表示。D值越大,表明該微生物的耐熱性越強。
▲滅菌方法驗證時,微生物的耐熱參數(shù)一般使用D121℃。
▲D值需要特定的設(shè)備(抗力儀或油浴儀)方可測定。
●?存活時間:將生物指示劑暴露于滅菌條件下一定時間(盡可能長時間)后,使所有生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果均為陽性。
●?殺滅時間:將所有生物指示劑暴露于滅菌條件下一定時間(盡可能短時間)后,使所有生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。
F值又稱殺菌值,由于微生物的種類和溫度均為特指,通常F值要采用上下標標注,以便于區(qū)分。一般將標準殺菌條件下的F值記為在121℃熱力致死溫度下腐敗菌的熱力致死時間,用F0值表示。
05.北京陸橋生物指示劑產(chǎn)品
北京陸橋技術(shù)股份有限公司為 KINTEK 滅菌生物指示劑總代理,KINTEK滅菌指示劑系列產(chǎn)品適用于制藥、化妝品、食品等工業(yè)領(lǐng)域和各種檢測機構(gòu)。產(chǎn)品生產(chǎn)符合《消毒技術(shù)規(guī)范》、GB18281、ISO13485、《中國藥典》、EP、USP等法規(guī)要求,產(chǎn)品種類齊全、質(zhì)量穩(wěn)定,并支持不同滅菌條件的非標定制。
用途:121℃壓力蒸汽滅菌過程及效果監(jiān)測
菌種:ATCC 7953 嗜熱脂肪芽孢桿菌(G. Stearothermophilus)
芽孢含量:5.0×105~3.0×106?CFU/ 支
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參考文獻
1. 中華人民共和國藥典2020年版 四部[S].
2. 化學藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導原則[S].
3.?GB 18281.1~3-2015 醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物[S].
4. GB/T 19972-2018醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示劑選擇、使用和結(jié)果判斷指南[S].
5. GB/T 24628-2009 醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物與化學指示物 測試設(shè)備[S].
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