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沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)

發(fā)布時(shí)間: 2021-12-29

引言


經(jīng)過(guò)層層剝離,迷霧終將散去,光明即將到來(lái)。

我們還需要兩件工具,生化鑒定和血清學(xué)鑒定。

它們會(huì)幫我們鑒別黑白。

真相永遠(yuǎn)只有一個(gè)!



一、純化和生化鑒定


國(guó)標(biāo)流程要求從選擇分離平板上挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落,接種三糖鐵、賴氨酸和營(yíng)養(yǎng)瓊脂,如果三糖鐵、賴氨酸結(jié)果不能排除,那些再做其他生化。這里最大的困難是一個(gè)單菌落不夠接種三種培養(yǎng)基。而且初篩的作用有限,表中能排除的兩項(xiàng),菌落在平板上都不是最典型的沙門氏菌特征。


沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)


所以我們建議第一天先純化,第二天用純化后的菌將所有生化一起做。時(shí)間上與國(guó)標(biāo)一樣,都是兩天得到完整生化結(jié)果,但是菌經(jīng)過(guò)了純化,排除了選擇分離平板對(duì)生化的干擾,又獲得了大量單菌落,既能滿足生化試驗(yàn)的用菌量,也能挑菌做血清。


操作順序明白后,我們?cè)賮?lái)理一下試驗(yàn)思路。

國(guó)標(biāo)條款5.4.2.1反應(yīng)序號(hào)A1:典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常,按表4可判定為沙門氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。

根據(jù)上述這段話,我們理解表4所列的就是尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常的組合,那么表4的硫化氫和靛基質(zhì)應(yīng)該與A1中一致。所以我們將表3和表4合并,再把表4補(bǔ)充完整,就可以得到下表。

沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)

我們自己做生化鑒定時(shí),如果出現(xiàn)上表中的組合,那么就按判定結(jié)果進(jìn)行補(bǔ)充生化試驗(yàn)即可。

如果不符合上表中任何一種組合,那么直接判非沙門氏菌。

如此一來(lái),沙門氏菌生化鑒定的思路就簡(jiǎn)化了。

另外,表4第二行組合需要補(bǔ)充一些群生化,目的是看這株菌到底屬于哪個(gè)群。這里的群其實(shí)是沙門氏菌分類的亞屬。如果遇到了,補(bǔ)齊下表生化即可。

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我們目前常見(jiàn)菌做生化的情況如下:


ATCC14028 鼠傷寒沙門氏菌,生化結(jié)果符合A1組合。

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ATCC13076 腸炎沙門氏菌,生化結(jié)果符合A1組合。

沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)


CMCC50071 傷寒沙門氏菌,生化結(jié)果符合A1組合。

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ATCC10708 豬霍亂沙門氏菌,生化結(jié)果符合A3組合,A3的補(bǔ)充試驗(yàn)ONPG也為陰性。

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ATCC12325?雙相亞利桑那,生化結(jié)果符合A1組合。

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ATCC25922 大腸埃希氏菌,生化結(jié)果硫化氫與靛基質(zhì)不符合A1組合,故判非沙門。

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CMCC49005 奇異變形桿菌,生化結(jié)果賴氨酸與尿素不符合A1組合,故判非沙門。

沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)



從上述不同菌的生化能看出,選擇分離平板中常見(jiàn)的干擾菌在生化層面幾乎都被排除。大腸埃希氏菌通過(guò)硫化氫和靛基質(zhì)排除;奇異變形桿菌通過(guò)賴氨酸和尿素排除。所以生化鑒定的效果還是很好的,不過(guò)依然有一些情況需要用血清學(xué)進(jìn)行輔助判定。


二、血清學(xué)鑒定


關(guān)于血清學(xué)有幾點(diǎn)需要明確:

1、血清學(xué)在鑒定方面只是生化鑒定的輔助,血清學(xué)主要的作用在于沙門氏菌的分型。

2、血清學(xué)鑒定(主要是多價(jià)血清的鑒定)是沙門氏菌鑒定的重要部分,無(wú)論生化鑒定結(jié)果如何,血清學(xué)試驗(yàn)都必須完成。

3、血清學(xué)分型在此國(guó)標(biāo)中是選作項(xiàng)目,而且內(nèi)容較為復(fù)雜,我們不做贅述。我們重點(diǎn)介紹多價(jià)血清的鑒定。

首先我們來(lái)認(rèn)識(shí)一下沙門氏菌常見(jiàn)的三種抗原,O抗原、H抗原和Vi抗原。

沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)

O抗原是菌體抗原,為細(xì)胞壁脂多糖中特異性多糖部分,以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列。每個(gè)沙門氏菌血清型含一種或多種O抗原。基本每一個(gè)沙門氏菌都會(huì)有O抗原。

H抗原是鞭毛抗原,有鞭毛就會(huì)有動(dòng)力,所以大部分沙門氏菌都有H抗原,只有雞雛沙門氏菌是沒(méi)有鞭毛的,也就沒(méi)有H抗原。H抗原分第Ⅰ相和第Ⅱ相兩種。第Ⅰ相特異性高,以a,b,c。。。。表示。第Ⅱ相特異性低,可為多種沙門氏菌共有,以1,2,3。。。。。表示。同時(shí)擁有兩個(gè)相的沙門氏菌稱雙相菌。

Vi抗原是一種表面抗原。只有少數(shù)沙門氏菌才有,比如傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌等。Vi抗原可阻止O抗原與其相應(yīng)抗體的凝集反應(yīng)。Vi抗原不穩(wěn)定,可通過(guò)加熱破壞。

做血清試驗(yàn)時(shí)最好每步都帶上自凝試驗(yàn),即可以觀察自凝,也可以做為陰性對(duì)照(一般都不會(huì)自凝),試驗(yàn)的操作流程如圖所示:


沙門氏菌檢驗(yàn)流程詳解(完結(jié)篇)


備注:

1、上述流程只涉及了多價(jià)凝集試驗(yàn),不涉及H抗原分型試驗(yàn)。

2、熱處理一般建議,將菌做成濃菌液于沸水浴中煮沸15-60min,之后再進(jìn)行O多價(jià)凝集試驗(yàn)。

3、當(dāng)H多價(jià)不凝集時(shí)應(yīng)考慮菌活力是否不足,以及是否經(jīng)過(guò)了半固體平板培養(yǎng)讓鞭毛伸展。

血清學(xué)操作視頻:

O多價(jià)凝集試驗(yàn)和H多價(jià)凝集試驗(yàn):




三、結(jié)果與報(bào)告


綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果,報(bào)告25g(mL)樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。

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沙門的迷霧就此破除,陽(yáng)光再次照耀大地。

希望本文能對(duì)大家有幫助!


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