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產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

發(fā)布時(shí)間: 2021-10-26


“牛奶發(fā)酵”是產(chǎn)氣莢膜梭菌的重要生化特征之一。我們?cè)诓僮鲿r(shí)會(huì)遇到各種問題,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。下面小編就關(guān)于這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)和小伙伴們簡(jiǎn)單探討一下,希望能為大家解決這一難題。

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

“牛奶發(fā)酵”實(shí)驗(yàn)使用含鐵牛奶培養(yǎng)基。


產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法


檢驗(yàn)原理


產(chǎn)氣莢膜梭菌能分解乳糖產(chǎn)酸,使酪蛋白凝固,同時(shí)產(chǎn)生大量氣體,將凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀,有時(shí)可將液面向上推擠,甚至?xí)_開試管帽,稱為“暴烈發(fā)酵”。



操作步驟

1

配制


滅菌溫度和時(shí)間嚴(yán)格按照標(biāo)簽要求操作,滅菌后迅速冷卻(宜現(xiàn)用現(xiàn)配)。

2

接種


取生長(zhǎng)旺盛的新鮮FTG培養(yǎng)液1ml,深入培養(yǎng)基底部進(jìn)行接種。

3

培養(yǎng)


46℃±0.5℃水浴培養(yǎng),水浴培養(yǎng)時(shí)確保水面高于培養(yǎng)基液面。

4

結(jié)果觀察


46℃±0.5℃水浴培養(yǎng)2 h后,每小時(shí)觀察一次,觀察至5h。

5

結(jié)果判斷


5h內(nèi)不發(fā)酵者為陰性,有“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象者為陽(yáng)性。


培養(yǎng)基質(zhì)控

(GB 4789.28-2013)

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

注意事項(xiàng)



產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法


1.?菌株生長(zhǎng)狀態(tài)

使用生長(zhǎng)旺盛的新鮮菌,是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵一步。

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

FTG培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果

(左:生長(zhǎng)良好;右:空白)



2.

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(FTG)的使用

FTG培養(yǎng)基高壓滅菌后若不及時(shí)使用,成分中的刃天青可使氧化層由淺黃色變?yōu)榉奂t色,接種前,觀察培養(yǎng)基氧化層高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/3,否則,使用前需要脫氧。

FTG脫氧方法:100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過20分鐘),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。


3.

滅菌

配制含鐵牛乳培養(yǎng)基時(shí),我們常遇到一些滅菌鍋滅菌完成后,需要等待一段時(shí)間才能取出培養(yǎng)基,這時(shí),取出的培養(yǎng)基就已經(jīng)是凝固的狀態(tài),無法使用。



針對(duì)這種情況,小編采取三種方式配制含鐵牛奶培養(yǎng)基,模擬可能遇到的不同情況,并進(jìn)行了接菌實(shí)驗(yàn):


A

?加熱煮沸至完全溶解,每個(gè)試管分裝10mL培養(yǎng)基,115℃滅菌10min,迅速冷卻后待用。


B

??加熱煮沸至完全溶解,每個(gè)試管分裝10mL培養(yǎng)基,115℃滅菌10min,自然冷卻后待用。(模擬高壓鍋不能及時(shí)打開)


C

采用煮沸滅菌的方法配置培養(yǎng)基,無菌操作下,試管分裝10mL培養(yǎng)基待用(試管需提前滅菌)。


三種滅菌效果的空白管:

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法


接菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

產(chǎn)氣莢膜梭菌“牛奶發(fā)酵”的原理與操作方法

總結(jié)

采用煮沸滅菌的培養(yǎng)基和嚴(yán)格按照標(biāo)簽滅菌并迅速冷卻的培養(yǎng)基可獲得正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,若使用已經(jīng)凝固的培養(yǎng)基進(jìn)行暴烈發(fā)酵實(shí)驗(yàn),可能導(dǎo)致結(jié)果異常。


4.

儲(chǔ)存

建議儲(chǔ)存條件為陰涼干燥處,開封后盡量做好密封。在配制培養(yǎng)基時(shí),可以先聞一下培養(yǎng)基的氣味,應(yīng)是脫脂奶粉的香氣,如有異味,培養(yǎng)基可能已發(fā)生變質(zhì),不建議使用。





參考文獻(xiàn)



1、GB 4789.13-2012食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)

2、GB 8538-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法

3、《中華人民共和國(guó)藥典》2020版



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