克羅諾桿菌的危害

克羅諾桿菌是一種條件致病菌，高風(fēng)險人群主要是嬰幼兒，特別是早產(chǎn)兒、低出生體重兒和免疫力低下人群，可引起嚴(yán)重的壞死性小腸結(jié)腸炎、菌血癥和腦膜炎等疾病，死亡率高達(dá)40%~80%。

因為該菌的強(qiáng)致病性、高死亡率以及易感人群的特殊性。所以，嬰幼兒配方食品中克羅諾桿菌屬檢測是非常重要且必不可少的檢測項目。國內(nèi)外相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)均明確規(guī)定嬰幼兒配方食品中不得檢出克羅諾桿菌屬。

為何進(jìn)行黃色素實驗？

在克羅諾桿菌屬檢測中，黃色素實驗一直是非常重要的鑒定步驟，后續(xù)生化也是在產(chǎn)黃色素的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。

黃色素實驗之所以重要，要從克羅諾桿菌屬的命名史說起。1980年之前根據(jù)生化反應(yīng)和產(chǎn)生黃色素等特征該菌被認(rèn)為是產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌；1980年命名為阪崎腸桿菌；2008年劃分為獨立的新屬克羅諾桿菌屬。所以，一直以來黃色素實驗都作為克羅諾桿菌屬鑒定的重要依據(jù)。

黃色素實驗特殊的培養(yǎng)溫度

GB4789.40-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)??食品微生物學(xué)檢驗克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)?檢驗》中要求，從顯色培養(yǎng)基挑取可疑菌接種TSA平板，25℃±1℃?培養(yǎng)48h±4h。挑取黃色可疑菌落進(jìn)行后續(xù)鑒定。

黃色素實驗的培養(yǎng)溫度有別于其他步驟的培養(yǎng)溫度，因為在25℃±1℃培養(yǎng)條件下更利于黃色素的產(chǎn)生。

下面我們用克羅諾桿菌屬的標(biāo)準(zhǔn)菌株及樣品分離株對培養(yǎng)溫度進(jìn)行驗證。菌株劃線TSA平板分別置于25℃及36℃培養(yǎng)48h，觀察黃色素產(chǎn)生情況。

實驗結(jié)果如下圖所示：

從實驗圖片可以得出結(jié)論：36℃培養(yǎng)48h菌落生長更大，但是多數(shù)菌株黃色素的產(chǎn)生比25℃培養(yǎng)48h要差。有些菌株差異不大。因此，進(jìn)行黃色素實驗時，TSA平板需要放置于25℃±1℃進(jìn)行培養(yǎng)。

通過實驗不僅可以看到不同培養(yǎng)溫度對于黃色素產(chǎn)生的影響；也可以看到即便是25℃進(jìn)行培養(yǎng)，不同菌株產(chǎn)生的黃色素也不完全一致。顏色深淺差異很大，有些菌株甚至基本不產(chǎn)生黃色素。而且國外的研究也發(fā)現(xiàn), 近 8%的克羅諾桿菌屬不產(chǎn)黃色素。如果只依據(jù)黃色素來決定后續(xù)是否進(jìn)行生化鑒定，很容易造成假陰性。

所以，《ISO 22964：2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection of?Cronobacter?spp》標(biāo)準(zhǔn)中，TSA平板上黃色素觀察不再作為生化鑒定的項目。

綜上所述，在進(jìn)行克羅諾桿菌屬檢測時，如果顯色培養(yǎng)基上菌落典型，即便TSA上黃色素不明顯也建議進(jìn)行生化鑒定。最終根據(jù)生化鑒定結(jié)果進(jìn)行綜合判定。

參考文獻(xiàn)

1、GB4789.40-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)?食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)?檢驗

2、ISO 22964: 2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection ofCronobacter?spp.

3、萬志剛，呂敬章，趙琳娜，等.α-葡萄糖苷酶試驗在克羅諾桿菌鑒定中的應(yīng)用[J]. 食品安全質(zhì)量檢驗學(xué)報,2009,10(16) :5432~5435

4、Iversen C, Lehner A, Mullane N,?et al. Identification of 'Cronobacter' spp.(Enterobacter sakazakii) [J]. J Clin Microbiol, 2007, 45(11): 3814-381