全球每年由沙門氏菌引起的胃腸炎病例約有九千多萬例,導(dǎo)致約20萬人死亡,其中85%病例是食源性的,常居食物中毒榜首。因此,腸桿菌科的沙門氏菌是一類重要的、全球性的人畜共患的食源性致病菌,其檢測在畜禽健康、人類公共安全及食品安全等方面意義重大。
隨著技術(shù)的進(jìn)步,沙門氏菌鑒定雖然有多種新鑒定手段,如免疫學(xué)、分子生物學(xué)、基于細(xì)胞物理/化學(xué)特征的檢測技術(shù)、生物傳感器等檢測技術(shù),但目前限制最少、應(yīng)用最廣泛的還是傳統(tǒng)的檢測技術(shù),以形態(tài)學(xué)觀察、培養(yǎng)特征、生理生化特征、抗原特征的鑒別為主。
傳統(tǒng)檢測技術(shù)條件簡單、技術(shù)成熟、假陽性率低,但存在檢測時間長,準(zhǔn)確度受操作人經(jīng)驗判斷和菌活性影響等缺點(diǎn),而沙門氏菌屬包含2個種,含6個亞種,2579個血清型,具有多種生化組合特征,其生理生化特征鑒定受人員經(jīng)驗判斷和菌活性影響最大,這也是沙門氏菌屬傳統(tǒng)生化鑒定的一大難點(diǎn)。
下面我們就沙門氏菌屬傳統(tǒng)生化鑒定流程、商品化試劑盒的使用,沙門菌及常見干擾菌生化鑒定現(xiàn)象,常見問題來為您解析這一操作步驟。
01?? 沙門氏菌屬傳統(tǒng)生化鑒定 流程
為幫助大家理順流程,我們依據(jù)GB4789.4-2016標(biāo)準(zhǔn),將沙門氏菌屬的生化鑒定判定步驟簡化如下圖:
流程??
其中,必須用到的生化試劑有五種:
三糖鐵瓊脂、賴氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素、氰化鉀。
可能用到的生化試劑有三種:
甘露醇、山梨醇、ONPG
?測試中分離的可疑單菌落經(jīng)純化后,每個菌株測試一組,以確認(rèn)該菌是否為沙門氏菌屬。
02? 沙門氏菌傳統(tǒng)生化鑒定商品化試劑盒 操作
為更方便、快速地完成沙門氏菌屬的系列生化鑒定并判定,我們可以選購商品化套裝生化試劑盒。
下面,我們以陸橋DBI-05沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒操作視頻為大家演示:
https://v.qq.com/x/page/m3202nftgzu.html
視頻指路牌:
經(jīng)過培養(yǎng)、滴加附加試劑后,按下表判斷各項生化試劑結(jié)果:
然后,參照01沙門氏菌屬傳統(tǒng)生化鑒定流程部分,判斷該菌是否為沙門氏菌。
03? 沙門氏菌及常見干擾菌生化鑒定 結(jié)果
典型(完全符合A1組合結(jié)果)的沙門氏菌生化結(jié)果為:
其他常見沙門及干擾菌生化結(jié)果見下表:
04? 沙門氏菌傳統(tǒng)生化鑒定 常見問題
在沙門氏菌傳統(tǒng)生化鑒定過程中,我們還可能會遇到以下常見問題:
Q1:在三糖鐵實(shí)驗中,菌株產(chǎn)硫化氫變黑覆蓋了斜面底層的顏色,該如何判定底層產(chǎn)酸還是產(chǎn)堿?
A1:測試菌株產(chǎn)硫化氫,可判定底層產(chǎn)酸變黃。
為更好地觀察判定,可①減少接種量(先斜面劃線,再留少量菌進(jìn)行穿刺,注意不要穿刺到底部);②縮短培養(yǎng)時間(8h-18h)。
此外,還需要注意封膜保濕,防止斜面干縮導(dǎo)致結(jié)果誤判。
Q2:生化鑒定使用的菌懸液濁度要求多少?
A2:生化鑒定套裝為微量鑒定系統(tǒng),對于菌懸液濃度有要求,使用0.5麥?zhǔn)蠞岫冗M(jìn)行接種,菌懸液濃度過大或者過小對實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確度有影響。
Q3:尿素酶變淺橙色,如何判定是陰性還是陽性?
A3:尿素酶黃色或橙色均判定為陰性,只有玫紅色或紅色才判定為陽性。
還有更多干制生化套裝,歡迎您的關(guān)注和來電咨詢。
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