受寒潮影響，我國多地區(qū)出現(xiàn)大范圍低溫雨雪凝凍天氣，戶外低溫，室內(nèi)環(huán)境溫度也隨之受到較大影響。在ELISA檢測工作中，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度如何控制呢？檢測過程中還有哪些注意事項(xiàng)……小編給您實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)分享。
ELISA試劑盒檢測技巧及經(jīng)驗(yàn)分享
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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測法具有敏感性高，特異性強(qiáng)，快速等特點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌毒素殘留檢測。但該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多，其中的每一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在實(shí)際測定操作中一定要注意以下幾點(diǎn)。
一、溫度
1. 試劑盒回溫
大多數(shù)ELISA檢測試劑盒為冷藏（2℃-8℃）保存。從冰箱拿出來后，先不要急于打開試劑盒，要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無冷凝水。檢測所用的試劑需充分混勻且徹底溶解后再用。
Tip：提前1~2小時(shí)取出試劑盒，放在室溫中；或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。
2. 環(huán)境溫度的控制
實(shí)驗(yàn)室可采用以下措施控制溫度：
1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫濕度表，且確保定期計(jì)量。
2）根據(jù)天氣情況設(shè)定實(shí)驗(yàn)室空調(diào)制冷或加溫功能，待室溫穩(wěn)定且無干擾的條件下再開始檢測流程。
3）選用帶溫控裝置的孵育儀器，如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開啟預(yù)熱。
Tip：大多數(shù)試劑盒加樣后反應(yīng)時(shí)間較短，環(huán)境溫度對檢測結(jié)果會有很大影響，所以控制好環(huán)境溫度是保證試劑盒檢測結(jié)果有效的重要因素。
3. 孵育
孵育時(shí)要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干。孵育時(shí)使用封板膜，并置于暗處孵育。多塊板一起實(shí)驗(yàn)時(shí)，要平放各板，不要疊放，避免溫度擴(kuò)散的不均勻性或邊緣效應(yīng)。
圖1 ?ELISA試劑盒檢測孵育中
二、剩余試劑的妥善保存
試劑盒恢復(fù)至室溫后，取出要使用的酶標(biāo)板孔，未使用的酶標(biāo)板孔應(yīng)及時(shí)放回鋁箔袋，加入干燥劑，封緊封口，2℃-8℃冷藏保存。
Tip: 切忌將未完全平衡至室溫的酶標(biāo)板放回鋁箔袋，因?yàn)榇藭r(shí)由于溫度差，酶標(biāo)板上會有水汽，不利于穩(wěn)定保存。
三、加樣
1. 加樣要快速準(zhǔn)確，時(shí)間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。
2. 如樣品量較大，可分次完成實(shí)驗(yàn)，或?qū)y樣液置于預(yù)混微孔板中使用多通道移液器快速移取。
3. 如吸取同一試劑，可將試劑倒入V型加樣槽中，使用多通道移液器快速移取。
Tip：在加樣槽上套上一次性PE手套，再倒入檢測用試劑，可以保證試劑完整性且不被污染。加樣槽更換一次性手套后可繼續(xù)下一種試劑的使用。
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? 四、手動洗板操作指南
? ? 1. 當(dāng)洗滌緩沖液有結(jié)晶析出時(shí)，可用手反復(fù)揉搓瓶體使結(jié)晶物充分溶解再配制。
2. 加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。
3. 加好洗液后輕輕搖動微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍干，選用無粉塵和碎屑的優(yōu)質(zhì)吸水紙。需要用力拍板，使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁。
4. 不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。
? ?Tip：拍板用的吸水紙可選擇廚房用紙，吸水性好且無碎屑。為保證微孔洗液浸泡時(shí)間一致，可采用從前至后和從后至前的順序交替加洗液的方法。
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? 五、預(yù)實(shí)驗(yàn)的必要性
? ??1. 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)可以熟悉整個實(shí)驗(yàn)的流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；
2. 可以測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費(fèi)過多樣本；
3. 可以對樣品中目的分析物的濃度作一下大致參考，以確定合適稀釋度。
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關(guān)注以上幾個方面，希望對大家的ELISA檢測工作起到一定的幫助。