乳酸菌是能利用可發(fā)酵碳水化合物產生大量乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌。乳酸菌對營養(yǎng)的需求比較復雜,生長需要碳水化合物、氨基酸、肽類、維生素、礦物質、脂肪酸、酯類、核酸衍生物等,一般的肉湯培養(yǎng)基難以滿足其營養(yǎng)要求。在乳酸菌檢測中,國內外相關標準用于嗜熱鏈球菌計數(shù)的培養(yǎng)基主要有兩個:M17瓊脂和MC培養(yǎng)基,兩者在嗜熱鏈球菌計數(shù)中有哪些區(qū)別呢?
01 先說M17瓊脂
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M17瓊脂可用于從發(fā)酵乳等產品中檢測、分離和富集嗜熱鏈球菌(Strept.thermophilus)。M17瓊脂作為分離嗜熱鏈球菌的標準培養(yǎng)基,不僅可用于改善嗜熱鏈球菌及其噬菌體的生長,在培養(yǎng)苛養(yǎng)的乳酪鏈球菌(Strept. cremoris)、丁二酮鏈球菌(Strept. diacetilactis)和乳鏈球菌(Strept. Iactis)方面,M17培養(yǎng)基的表現(xiàn)也優(yōu)于其它同類培養(yǎng)基。
在培養(yǎng)過程中,酸度過低會嚴重影響嗜熱鏈球菌的生長。成分中大量的β-甘油磷酸鈉具有良好的緩沖能力,防止pH的迅速降低,維持體系pH>5.7。同時β-甘油磷酸鈉抑制酸奶中的乳桿菌的生長,如保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus),非常適合發(fā)酵乳中的嗜熱鏈球菌的計數(shù)與復蘇。成分中的胨和牛肉浸粉提供氮源、碳源、維生素和礦物質,酵母粉提供嗜熱鏈球菌生長所需的B族維生素,抗壞血酸起促進生長的作用,硫酸鎂提供生長所必需的鎂離子。
02 再說MC培養(yǎng)基
MC培養(yǎng)基也是用于嗜熱鏈球菌計數(shù)的標準培養(yǎng)基,主要依靠溶鈣圈法(一些產酸細菌在含有CaCO3的培養(yǎng)基上產生CaCO3溶解圈)對乳酸菌進行篩選。
大豆蛋白胨、牛肉粉、酵母粉提供菌體生長所需的氮源、碳源、維生素、礦物質及其他的營養(yǎng)元素,葡萄糖和乳糖作為碳水化合物促進乳酸菌的生長,碳酸鈣中和菌體代謝產生的酸,以緩解其對細胞的酸毒性,鑒別出能產生酸的細菌,并維持培養(yǎng)基的pH值,中性紅作為酸堿指示劑。
03 兩種培養(yǎng)基比對
現(xiàn)在我們知道了M17瓊脂與MC培養(yǎng)基的性能特點及適用范圍,下面我們再來看一下它們的具體應用。
先來比較乳酸菌標準菌株在兩種培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)和生長情況。
再來比較兩種培養(yǎng)基對酸奶樣品中嗜熱鏈球菌計數(shù)的應用。實驗選取20種不同品牌的市售酸奶進行計數(shù),發(fā)現(xiàn)M17瓊脂上的菌落數(shù)普遍高于MC培養(yǎng)基。隨機選取10種樣品培養(yǎng)后的M17瓊脂和MC培養(yǎng)基,每個平板挑取10個菌落進行鏡檢,某一樣品的M17瓊脂上發(fā)現(xiàn)生長良好的乳桿菌,如下圖所示(該酸奶樣品所含乳酸菌:嗜熱鏈球菌?保加利亞乳桿菌?鼠李糖乳桿菌?嗜酸乳桿菌(H-A3)?長雙歧桿菌(H-B46)干酪乳桿菌)
MC培養(yǎng)基上嗜熱鏈球菌與乳桿菌的區(qū)分
總結
根據(jù)筆者的實驗結果,以及對國內外研究進展的分析,對兩種培養(yǎng)基的區(qū)別進行了簡要匯總。
1.菌落大小及數(shù)量:與MC培養(yǎng)基相比,在M17瓊脂上生長的嗜熱鏈球菌菌落更大、數(shù)量更多,回收率更高。差異來源于培養(yǎng)基營養(yǎng)成分和緩沖體系的不同。與M17瓊脂相比,MC培養(yǎng)基中的緩沖體系是碳酸鈣,其緩沖能力弱于β-甘油磷酸鈉。
2.菌落觀察計數(shù):M17瓊脂上菌落更加清晰,方便計數(shù)。因為M17瓊脂不含有碳酸鈣,培養(yǎng)基透明度好,方便計數(shù)。
3.菌株生長情況:MC培養(yǎng)基特異性更強。一些乳酸桿菌在M17瓊脂上可生長且與嗜熱鏈球菌無法區(qū)分。
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