前言
最近小編注意到,有一個(gè)號(hào)稱能讓“微生物飛起來(lái)”的新型鑒定技術(shù)——MALDI-TOF技術(shù),在行業(yè)內(nèi)名聲大噪。那么,“這究竟是一個(gè)什么樣的技術(shù)呢?”下面就來(lái)跟著小編,一起揭開(kāi)它神秘的面紗!
一、微生物鑒定方法體系
微生物鑒定方法多種多樣。如最常使用的形態(tài)觀察、?鏡檢、?重要的生化反應(yīng),還有準(zhǔn)確度較高的基因鑒定法。
那么今天小編要介紹的MALDI-TOF方法,是利用對(duì)核糖體蛋白檢測(cè)及與標(biāo)準(zhǔn)圖庫(kù)比對(duì)的一種質(zhì)譜方法。
二、MALDI-TOF的原理
MALDI-TOF,全稱基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)。
該方法檢驗(yàn)原理是:
微生物中分子量在2000-20000Da范圍內(nèi)的核糖體蛋白質(zhì),其表達(dá)基本不受培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、滅活方式以及生長(zhǎng)周期等的影響,屬于保守表達(dá)的蛋白質(zhì),不同種的微生物(甚至亞種)其保守蛋白會(huì)有差異,因此每種微生物有其獨(dú)特的蛋白質(zhì)指紋圖譜(PMF);通過(guò)MALDI-TOF測(cè)得的微生物蛋白質(zhì)指紋圖譜,再與標(biāo)準(zhǔn)庫(kù)里的指紋圖譜進(jìn)行匹配、對(duì)比,從而完成對(duì)微生物快速準(zhǔn)確的鑒定。
圖譜形成、比對(duì)及鑒定結(jié)果
三、操作流程
1、取純化后的新鮮培養(yǎng)物,直接涂靶或進(jìn)行提取后涂靶;2、樣品點(diǎn)靶后,與基質(zhì)混合晾干;3、將靶板進(jìn)艙,確認(rèn)真空度均正常和參數(shù)設(shè)置均準(zhǔn)確后,方可開(kāi)始采譜;4、獲得樣品蛋白質(zhì)圖譜后,系統(tǒng)將自動(dòng)與標(biāo)準(zhǔn)庫(kù)里的指紋圖譜進(jìn)行匹配、對(duì)比;5、生成最后的結(jié)果與報(bào)告。
四、MALDI-TOF的優(yōu)點(diǎn)
這項(xiàng)“如此高大上”的技術(shù),具體有什么優(yōu)點(diǎn)呢?
五、MALDI-TOF的其他應(yīng)用
除了微生物鑒定外,MALDI-TOF技術(shù)還可應(yīng)用于多種領(lǐng)域,范圍極廣:
1、可疑菌溯源性分析:在檢測(cè)出未知菌時(shí),可自建菌庫(kù),保留菌株圖譜信息,有助日后可疑菌的溯源分析。
2、腫瘤篩查中的運(yùn)用:利用弱陽(yáng)離子磁珠聯(lián)合MALDI-TOF-MS分析腫瘤患者和健康對(duì)照血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜,鑒定差異表達(dá)蛋白,建立疾病診斷模型,探索該疾病的發(fā)病機(jī)制。
3、細(xì)菌耐藥性分析:MALDI-TOF MS檢測(cè)細(xì)菌耐藥性的方法主要分為 3 類:?檢測(cè)耐藥菌株的特征性質(zhì)譜峰、細(xì)菌酶活性作用下抗菌藥物的改變和抗菌藥物存在下細(xì)菌生長(zhǎng)情況。
結(jié)語(yǔ)
傳統(tǒng)的微生物鑒定技術(shù)復(fù)雜、繁瑣,耗時(shí)、耗力,對(duì)技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高,而使用飛行質(zhì)譜鑒定技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)便快速結(jié)果準(zhǔn)確。相信在不久的將來(lái),這項(xiàng)技術(shù)會(huì)得到越來(lái)越多的關(guān)注,應(yīng)用也越來(lái)越廣。