1.T-2毒素簡介
T-2毒素和HT-2毒素屬于單端孢霉烯族毒素,該族毒素種類接近190種。根據(jù)該毒素化學結構中C3和C15之間是否存在大環(huán),以及羥基和乙酸基數(shù)量,可以分為A、B、C、D共4類。T-2毒素是A類單端孢霉烯族毒素中毒性最強的一種真菌毒素,HT-2毒素為T-2毒素在體內與體外最為主要的代謝產(chǎn)物,二者在自然界中分布廣泛。此外,T-2毒素和HT-2毒素還可存在于各類谷物、人類食品、動物飼料及動物制品中。T-2毒素可以通過污染飼料對家畜造成危害,引起動物拒食、嘔吐、腹瀉、胃腸道出血等癥狀。T-2毒素具有很強的免疫毒性,感染動物后可引起免疫機能下降。
圖1??T-2毒素結構式
2.?T-2毒素的限量標準
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我國飼料衛(wèi)生標準GB 13078-2017中飼料原料和飼料產(chǎn)品中T-2毒素的含量規(guī)定如下:
3.酶聯(lián)免疫法檢測T-2毒素
定量檢測原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。酶標板微孔包被有T-2毒素特異性抗體,T-2毒素標準品或樣品以及T-2毒素-HRP酶結合物(檢測溶液)加入包被有抗體的微孔中。T-2毒素-HRP酶結合物與標準品或樣品中的T-2毒素競爭結合T-2毒素抗體。未結合的T-2毒素-HRP酶結合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍色物質。加入終止液終止反應,藍色物質變成黃色。450nm下測定吸光值,吸收光的強度與樣品和標準品中T-2毒素的濃度成反比。
圖2 ?B4196?T-2毒素試劑盒
4.?Symmetric?側向層析試紙條檢測T-2毒素
定量側向層析檢測基于免疫層析測定原理。微孔中有耦合在膠體金上的T-2毒素抗體。在微孔中加入待測液,反復吹打形成懸浮混合液后開始孵育。在孵育過程中,T-2毒素(若存在)與膠體金抗體結合,達到抑制檢測線顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測區(qū)(檢測區(qū)內有控制線和檢測線)。測試有效時,上方的控制線會顯色。檢測線的顏色深淺與樣品中T-2毒素濃度成反比。通過使用 S-Flow 軟件及對稱定量技術可以準確測定T-2毒素的濃度。
圖3 ?S-FLOW讀數(shù)儀
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