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真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇

發(fā)布時間: 2019-11-25

真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇



1.?伏馬毒素簡介


伏馬毒素(Fumnosins)是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)、輪狀鐮刀菌(Fusarium verticillioides)等在合適的環(huán)境下生成的次級代謝產(chǎn)物。因鐮刀屬真菌是污染玉米、高粱、小麥等農(nóng)作物的優(yōu)勢菌種,故伏馬毒素可通過食物鏈傳播影響人和動物的健康。1998年,Gelderblom首次從串珠鐮刀菌培養(yǎng)液里分離獲得伏馬毒素,時至今日,已鑒定出28種不同的異構(gòu)體。伏馬毒素均為結(jié)構(gòu)類似的雙酯化合物,直鏈骨架含有19或20個碳原子,各種羧、羥基、酯鍵分布在骨架兩側(cè)。到目前為止,發(fā)現(xiàn)的伏馬菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11種,其中伏馬毒素B1(FB1)是其主要組分。FB1對食品污染的情況在世界范圍內(nèi)普遍存在,主要污染玉米及玉米制品。FB1為水溶性霉菌毒素,對熱穩(wěn)定,不易被蒸煮破壞,所以同黃曲霉毒素(AFT)一樣,控制農(nóng)作物在生長、收獲和儲存過程中的霉菌污染仍然是至關(guān)重要,伏馬毒素可以通過糧食加工、飼料生產(chǎn)等過程對畜牧業(yè)乃至人類健康產(chǎn)生較嚴(yán)重的危害。

真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇

圖1?伏馬毒素B1結(jié)構(gòu)式


2. 伏馬毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)


2017年10月27日,世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考,伏馬毒素B1、串珠鐮刀菌及其產(chǎn)生的毒素(伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和鐮刀菌素C)在2B類致癌物清單中。

我國飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 13078-2017中飼料原料和飼料產(chǎn)品中伏馬毒素的含量規(guī)定如下:


真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇


3.?酶聯(lián)免疫法檢測伏馬毒素


定量檢測原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。酶標(biāo)板微孔包被有伏馬毒素特異性抗體,伏馬毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品以及伏馬毒素-HRP酶結(jié)合物(檢測溶液)加入包被有抗體的微孔中。伏馬毒素-HRP酶結(jié)合物與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的伏馬毒素競爭結(jié)合伏馬毒素抗體。未結(jié)合的伏馬毒素-HRP酶結(jié)合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。加入終止液終止反應(yīng),藍(lán)色物質(zhì)變成黃色。450nm下測定吸光值,吸收光的強(qiáng)度與樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中伏馬毒素的濃度成反比。


真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇


真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇

圖2 ?B2896伏馬毒素試劑盒


4.Symmetric?側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l檢測伏馬毒素


定量側(cè)向?qū)游鰴z測基于免疫層析測定原理。微孔中有耦合在膠體金上的伏馬毒素抗體。在微孔中加入待測液,反復(fù)吹打形成懸浮混合液后開始孵育。在孵育過程中,伏馬毒素(若存在)與膠體金抗體結(jié)合,達(dá)到抑制檢測線顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測區(qū)(檢測區(qū)內(nèi)有控制線和檢測線)。測試有效時,上方的控制線會顯色。檢測線的顏色深淺與樣品中伏馬毒素濃度成反比。通過使用 S-Flow 軟件及對稱定量技術(shù)可以準(zhǔn)確測定伏馬毒素的濃度。


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3 ?S-FLOW讀數(shù)儀


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