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真菌毒素檢測技術(shù)——赭曲霉毒素A篇

發(fā)布時間: 2019-10-14

真菌毒素檢測技術(shù)——赭曲霉毒素A篇

1、?赭曲霉毒素A簡介


? ? ? 赭曲霉毒素(Ochratoxins)是一類由苯丙氨酸與異香豆素組成的結(jié)構(gòu)類似的聚酮類化合物,它是由曲霉菌和青霉菌產(chǎn)生的真菌毒素,依其發(fā)現(xiàn)順序分別稱為赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)、赭曲霉毒素C(OTC)和赭曲霉毒素D(OTD)。其中毒性最大、分布最廣的是赭曲霉毒素A。易存在于玉米、大豆、大麥、花生等谷物中。動物進食被赭曲霉毒素A污染的飼料后導致體內(nèi)赭曲霉毒素A的蓄積,而且不易被代謝降解,因此動物性食品尤其是豬的腎臟、肝臟、肌肉、血液以及乳和乳制品中常有赭曲霉毒素A檢出,在傳統(tǒng)發(fā)酵食品中如豆醬、食醋中也被檢出。
? ? 赭曲霉毒素A主要通過競爭性取代苯丙氨酰-tRNA 合成酶催化反應中的苯丙氨酸來抑制相關(guān)蛋白質(zhì)合成,同時也能通過脂質(zhì)過氧化和自由基形成誘導氧化應激,從而導致疾病的發(fā)生。赭曲霉毒素A對人和動物具有腎毒性、致畸性、致癌性以及潛在的神經(jīng)毒性等。


真菌毒素檢測技術(shù)——赭曲霉毒素A篇


2、?赭曲霉毒素A的限量標準


? ? 2017年10月,世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)將赭曲霉毒素A歸類在2B類致癌物清單中。歐盟對未加工谷物最高限量為5 μg/kg,谷物加工產(chǎn)品最高限量為3 μg/kg,葡萄酒及果酒中最高限量為2 μg/L。韓國對豆醬及其相關(guān)食品中赭曲霉毒素A 的最高限量為20 μg/kg。
? ? 我國飼料衛(wèi)生標準GB 13078-2017中規(guī)定配合飼料和青貯玉米中赭曲霉毒素A 含量不得超過100μg/kg。
? ? 我國《GB2761-2017食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》對食品中赭曲霉毒素A的限量規(guī)定如下:

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3、?酶聯(lián)免疫法檢測赭曲霉毒素A


? ?
定量檢測原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。酶標板微孔包被有赭曲霉毒素A特異性抗體,赭曲霉毒素A標準品或樣品以及赭曲霉毒素A-HRP酶結(jié)合物(檢測溶液)加入包被有抗體的微孔中。赭曲霉毒素A -HRP酶結(jié)合物與標準品或樣品中的赭曲霉毒素A競爭結(jié)合赭曲霉毒素A抗體。未結(jié)合的赭曲霉毒素A-HRP酶結(jié)合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍色物質(zhì)。加入終止液終止反應,藍色物質(zhì)變成黃色。450nm下測定吸光值,吸收光的強度與樣品和標準品中赭曲霉毒素A的濃度成反比。


真菌毒素檢測技術(shù)——赭曲霉毒素A篇


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4、Symmetric?側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l檢測赭曲霉毒素A


?定量側(cè)向?qū)游鰴z測基于免疫層析測定原理。微孔中有耦合在膠體金上的赭曲霉毒素A抗體。在微孔中加入待測液,反復吹打形成懸浮混合液后開始孵育。在孵育過程中,赭霉毒素A(若存在)與膠體金抗體結(jié)合,達到抑制檢測線顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測區(qū)(檢測區(qū)內(nèi)有控制線和檢測線)。測試有效時,上方的控制線會顯色。檢測線的顏色深淺與樣品中赭曲霉毒素A酮濃度成反比。通過使用 S-Flow 軟件及對稱定量技術(shù)可以準確測定赭曲霉毒素A的濃度。

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