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真菌毒素檢測技術(shù)——黃曲霉毒素M1篇

發(fā)布時間: 2019-07-16

?黃曲霉毒素M1簡介

黃曲霉毒素1993年被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物,是一種毒性極強的劇毒物質(zhì)。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用,嚴(yán)重時,可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。

黃曲霉毒素是黃曲霉菌(Asperillus Flavus)和寄生曲霉菌(Asperillus Parasiticus)的代謝產(chǎn)物之一,黃曲霉毒素M1主要存在于牛乳中,奶牛攝取了被黃曲霉毒素B1污染的飼料后,黃曲霉毒素B1在奶牛體內(nèi)通過羥基化作用轉(zhuǎn)化成黃曲霉毒素M1,因而奶牛分泌的乳汁中含有黃曲霉毒素M1。黃曲霉毒素M1致癌性與AFB1大致相同,國際癌癥研究機構(gòu)將黃曲霉毒素M1列為1類致癌物。

真菌毒素檢測技術(shù)——黃曲霉毒素M1篇

圖1 ?AFB1轉(zhuǎn)化成AFM1的反應(yīng)式

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黃曲霉毒素M1致癌機理:黃曲霉毒素M1遠(yuǎn)端呋喃環(huán)環(huán)氧結(jié)構(gòu)與體內(nèi)DNA嘌呤殘基共價結(jié)合,造成DNA的損傷,引起DNA結(jié)構(gòu)和功能改變,從而產(chǎn)生癌變。

黃曲霉毒素M1性質(zhì)穩(wěn)定,不被巴氏消毒破壞,高溫或高壓均無法破壞其結(jié)構(gòu),因此乳及乳制品中黃曲霉毒素M1的污染則嚴(yán)重威脅著人類健康。


2?黃曲霉毒素M1的限量標(biāo)準(zhǔn)

中國與美國、日本一致,都是0.5μg/kg,歐盟成員國以及與歐盟有貿(mào)易的非洲、亞洲、拉丁美洲部分國家相對嚴(yán)格,為0.05μg/kg,而歐盟對嬰幼兒配方食品,包括嬰幼兒配方牛奶則限量0.025μg/kg。

真菌毒素檢測技術(shù)——黃曲霉毒素M1篇



? ? ? 3?酶聯(lián)免疫法檢測黃曲霉毒素M1

? 定量檢測原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。酶標(biāo)板微孔包被有AFM1特異性抗體,AFM1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品以及AFM1-HRP酶結(jié)合物(檢測溶液)加入包被有抗體的微孔中。AFM1-HRP酶結(jié)合物與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的AFM1競爭結(jié)合AFM1抗體。未結(jié)合的AFM1-HRP酶結(jié)合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。加入終止液終止反應(yīng),藍(lán)色物質(zhì)變成黃色。450nm下測定吸光值,吸收光的強度與樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中AFM1的濃度成反比。


表1 ?Bio-Shield系列 黃曲霉毒素M1檢測試劑盒

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圖2?黃曲霉毒素M1 ES檢測試劑盒

ILVO:比利時弗拉芒農(nóng)業(yè)漁業(yè)和食品研究所,是歐洲最具盛名,最具有權(quán)威性的檢測機構(gòu)之一。


真菌毒素檢測技術(shù)——黃曲霉毒素M1篇


? ?4 免疫金標(biāo)快速試紙條檢測黃曲霉毒素M1

定量側(cè)向?qū)游鰴z測基于免疫層析測定原理。微孔中有耦合在膠體金上的AFM1特異性抗 體。在微孔中加入待測液,反復(fù)吹打形成懸浮混合液后開始孵育。在孵育過程中,黃曲霉毒素M1(若存在)與膠體金抗體結(jié)合,達(dá)到抑制檢測線顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測區(qū)(檢測區(qū)內(nèi)有控制線和檢測線)。測試有效時,上方的控制線會顯色。檢測線的顏色深淺與樣品中AFM1濃度成反比。通過使用?S-Flow?軟件及對稱定量技術(shù)可以準(zhǔn)確測定AFM1的濃度。


表2?Symmetric?黃曲霉毒素M1層析試紙條

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