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關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒(中)-初步生化鑒定

發(fā)布時(shí)間: 2018-11-20

乳制品是營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)質(zhì)蛋白且極易遭受致病菌的污染,而沙門氏菌是乳品檢測最普遍的項(xiàng)目,且沙門氏菌不分解蛋白質(zhì),被沙門氏菌污染的乳品常常不發(fā)生明顯腐敗,不易被發(fā)現(xiàn),所以沙門氏菌的檢測不能止步于選擇性分離的步驟,應(yīng)共同參考生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果來確定是否檢出沙門氏菌。

首先了解一下沙門氏菌屬的生化反應(yīng),如下圖【參考《沙門菌屬血清型診斷》朱超,許學(xué)斌編著】:


關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒(中)-初步生化鑒定

其中,傷寒沙門氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;亞利桑那菌可分解乳糖;豬霍亂、多數(shù)甲型副傷寒、仙臺(tái)、馬流產(chǎn)、雞、貝塔及一些傷寒沙門菌血清型等不產(chǎn)硫化氫或僅產(chǎn)生少量硫化氫。

沙門氏菌屬的種類繁多,抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜,截止2007年1月WHOCC-Salm出版的WKLM表解第9版已包括2579個(gè)血清型。

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沙門氏菌的生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)的操作較繁瑣,也有較多的操作點(diǎn)需要注意,否則檢測結(jié)果容易出錯(cuò),下面咱們一起來學(xué)習(xí)一下。

關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒(中)-初步生化鑒定

關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒(中)-初步生化鑒定

生化試驗(yàn)


1.三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)

根據(jù)GB4789.4-2016的表1中沙門氏菌屬的典型菌落特征描述,從選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落(用接種針自菌落中心挑?。?,直接接種于三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基,同時(shí)用接種環(huán)挑取相同菌落劃線營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純化,36℃±1℃培養(yǎng)16h-24h,必要時(shí)可延長培養(yǎng)至48h。


1.1三糖鐵試驗(yàn)

注意??三糖鐵瓊脂接種時(shí)先在斜面劃線,再于底層穿刺,但高層穿刺時(shí)接種針不能穿到底部,接種太深,否則有些菌產(chǎn)生的硫化氫會(huì)布滿試管底部,影響底層培養(yǎng)基顏色變化的觀察。

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建議接種后的三糖鐵瓊脂安瓿瓶用封口膜輕輕的覆蓋在瓶口,防止培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水干縮后氧氣進(jìn)入,底部的黃色被氧化變色,影響結(jié)果觀察;再用接種針在封口膜上扎些小孔利于培養(yǎng)過程中氧氣的供應(yīng)。

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1.2賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)

原理:某些細(xì)菌在酸性厭氧環(huán)境,且有賴氨酸底物存在的情況下能誘導(dǎo)產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶,使賴氨酸脫羧產(chǎn)生堿性物質(zhì)尸胺,導(dǎo)致培養(yǎng)基變紫,但不產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶的細(xì)菌只能代謝葡萄糖產(chǎn)酸培養(yǎng)基變黃。

注意??在進(jìn)行賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)時(shí),注意要挑取同一個(gè)待檢菌落同時(shí)接種氨基酸脫羧酶對(duì)照管和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)管各一支,接種后在對(duì)照管和試驗(yàn)管液面上方均需加無菌液體石蠟(一定要是無菌的)覆蓋。

您是否疑問為什么非要加無菌的液體石蠟?

由于氨基酸脫羧的產(chǎn)物尸胺、腐胺等遇氧不穩(wěn)定,所以需要加無菌液體石蠟覆蓋隔絕空氣,保持胺的穩(wěn)定性,確保試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。

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鼠傷寒沙門氏菌

ATCC 14028

1.3生化結(jié)果初步判斷

根據(jù)三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果,參考GB4789.4-2016中表2來初步判斷是否有可疑的沙門氏菌。

關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒(中)-初步生化鑒定


根據(jù)2的描述,如果遇到三糖鐵瓊脂的試驗(yàn)管底部變紅;整個(gè)三糖鐵瓊脂試管為黃色,并且賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)為陰性的試驗(yàn)結(jié)果時(shí),說明該菌株為非沙門氏菌,不需再做后續(xù)的生化試驗(yàn)。



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