近期愛爾蘭奶粉污染沙門氏菌的事件鬧的人心惶惶,雖然愛爾蘭政府后來發(fā)布公告表示未在任何愛爾蘭配方奶粉生產(chǎn)廠家發(fā)現(xiàn)沙門氏菌,但我們也不能忽視對沙門氏菌的檢驗,嬰幼兒的免疫系統(tǒng)較為脆弱,尤其是高度易感嬰兒,比如早產(chǎn)兒、低出生體重嬰兒、免疫缺陷嬰兒等,一旦喂食了被沙門氏菌污染的嬰幼兒配方乳粉,極易被感染致病,出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉等腸炎癥狀,嚴(yán)重的可能會引發(fā)敗血癥,甚至死亡。
下面讓我們溫習(xí)一下GB4789.4-2016沙門氏菌的檢驗過程及操作時的注意事項。
預(yù)增菌
樣品加入緩沖蛋白胨水(BPW)中進(jìn)行預(yù)增菌,任何樣品均需進(jìn)行預(yù)增菌。有盆友問啦,為什么要用BPW呢?那是因為啊,食品在加工過程中采用加熱、干燥等加工工藝使得細(xì)胞存在不同程度的受損,而緩沖蛋白胨水(BPW)呢,作為非選擇性的增菌培養(yǎng)基,較高pH的緩沖體系可以幫助受損的細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定、活力滿滿的生理狀態(tài),此處也可使用即用型的BPW,因為它操作方便,節(jié)省時間。
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選擇性增菌
這里要注意啦,增菌接種前一定要把預(yù)增菌后的BPW樣品溶液輕輕搖動混勻,這樣做的原因是有些沙門君是懶得動的(因為有些沙門氏菌沒鞭毛),它們會潛伏在溶液底層,所以我們要把增菌液“搖擺、搖擺”,讓不動的沙門君們在增菌液中都漂浮起來,吸出,分別接入TTB和SC培養(yǎng)基中。
此步驟防止漏檢的方式是采用兩種不同的選擇性增菌液(TTB和SC)進(jìn)行增菌,是因為沙門君的家族太龐大了,血清型都有2000多種,所以得加強(qiáng)引誘措施,采用不同的培養(yǎng)溫度和不同抑制性的培養(yǎng)基來給不同的沙門君提供安逸的環(huán)境來繁衍后代,同時盡量阻攔革蘭氏陽性菌和其他大多數(shù)的腸道菌來搗亂,有些細(xì)菌還是會趁虛而入的。
下面咱們來說一下TTB和SC使用過程中的注意事項:
TTB培養(yǎng)基:待基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至50℃以下時,加入煌綠和碘液,因為培養(yǎng)基中含有不溶解的CaCO3(用來中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)),會有大量的白色沉淀,在分裝時應(yīng)邊搖勻邊分裝,接種后培養(yǎng)條件為:42℃±1℃培養(yǎng)18h-24h;
SC培養(yǎng)基:千萬不可高壓滅菌,不可過度加熱,最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。發(fā)現(xiàn)干粉或溶液變紅就不要使用了。培養(yǎng)基開封后建議用封口膜密封后冷藏保存,可延緩培養(yǎng)基變質(zhì),接種后培養(yǎng)條件為:36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h;
增菌后的TTB與SC
分離
TTB與SC增菌液在接種選擇性分離培養(yǎng)基前,均應(yīng)輕輕搖動混勻,原因同選擇性增菌一樣,也是為了防止不運動的沙門氏菌漏檢;混勻后,用直徑為3mm的接種環(huán)(也就是實驗室用的10μL接種環(huán))將TTB與SC增菌液“分別”劃線接種于兩種選擇性平板,一種是BS瓊脂,為必選的選擇性分離培養(yǎng)基,另外一種選擇性分離培養(yǎng)基是從XLD瓊脂、HE瓊脂、沙門顯色培養(yǎng)基中選擇一個即可;沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征參考下圖:
注意:在一種選擇性瓊脂培養(yǎng)基上不同沙門氏菌會長出不同的菌落形態(tài),在做樣品檢驗時要參考上圖中沙門氏菌的菌落特征,將典型菌落及可疑菌落純化后做生化和血清鑒定,避免漏檢,例如:在XLD瓊脂接菌培養(yǎng)18h-24h時,鼠傷寒沙門氏菌為粉紅色菌落,呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,大腸埃希氏菌為黃色菌落,豬霍亂沙門氏菌為淡黃色菌落,比大腸埃希氏菌的顏色略淺,易混淆,為防止漏檢,XLD瓊脂平板上黃色菌落也應(yīng)做生化和血清鑒定,不可忽視。
下面咱們來說一下選擇性瓊脂培養(yǎng)基使用過程中的注意事項:
BS瓊脂:配制時不可高壓,煮沸滅菌即可,不可反復(fù)溶解,避免降低其選擇性;特別需要注意的一點是必須使用前一天配制,且在48h內(nèi)使用,超過48h也會降低其選擇性,請于室溫暗處貯存,接種后培養(yǎng)條件為:36℃±1℃培養(yǎng)40h-48h;
XLD瓊脂:配制時不可高壓,煮沸滅菌即可,不可反復(fù)溶解,避免降低其選擇性,請于室溫暗處貯存;該培養(yǎng)基宜于當(dāng)天配置,第二天使用,接種后培養(yǎng)條件為:36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h;
?HE瓊脂:配制時不可高壓,煮沸滅菌即可,不可反復(fù)溶解,避免降低其選擇性;接種后培養(yǎng)條件為:36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h;
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基:參考陸橋ESM005沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(SA)使用說明書。
好啦,咱們今天就先到這吧,關(guān)于沙門氏菌的生化和血清試驗操作下篇文章再細(xì)細(xì)道來。