? ?靛基質(zhì)試驗(yàn)（indole test）是微生物檢驗(yàn)的常用生化鑒定項(xiàng)目。反應(yīng)原理是：蛋白胨中的色氨酸被細(xì)菌產(chǎn)生的色氨酸酶水解，產(chǎn)生吲哚，在加入對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑（靛基質(zhì)試劑）后，與之作用生成醌類(lèi)結(jié)構(gòu)的玫瑰紅色物質(zhì)。
? ? ? ? 最近有很多小伙伴咨詢(xún)小編關(guān)于志賀氏菌檢驗(yàn)中靛基質(zhì)試驗(yàn)的問(wèn)題。在GB 4789.5－2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》中，關(guān)于志賀氏菌的生化描述如下：
? 其中的靛基質(zhì)試驗(yàn)除D群宋內(nèi)氏志賀氏菌為明確陰性結(jié)果外，其他志賀氏菌為多數(shù)陰性或者遲緩陽(yáng)性，其中對(duì)于福氏志賀氏菌描述為遲緩陽(yáng)性。
? ? ? ? GB 4789.5－2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》附錄Ａ中，對(duì)于試驗(yàn)方法是這樣描述的：
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? ?靛基質(zhì)試驗(yàn)，本來(lái)是挺簡(jiǎn)單的一個(gè)生化鑒定項(xiàng)目，但是大多數(shù)小伙伴都會(huì)糾結(jié)：志賀氏菌這個(gè)靛基質(zhì)試驗(yàn)究竟該培養(yǎng)多久？這個(gè)必要時(shí)，是什么意思？
?《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》（第八版）中描述“福氏志賀氏菌血清型6不產(chǎn)生吲哚，另外一些血清型產(chǎn)生吲哚不穩(wěn)定”。
? ?因此大家對(duì)于“不穩(wěn)定”、“遲緩陽(yáng)性”這些描述有以下疑慮：
? 1、是否多數(shù)福氏志賀氏菌都是遲緩陽(yáng)性？
? 2、遲緩陽(yáng)性需要培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)？
? 3、按照成品生化試劑培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)是陽(yáng)性還是陰性？
? 帶著這些問(wèn)題，小編進(jìn)行了相應(yīng)的驗(yàn)證試驗(yàn)，從試驗(yàn)中尋找這些問(wèn)題的答案。
? 我們使用不同菌種保藏中心的四株福氏志賀氏菌進(jìn)行試驗(yàn)。用平板上新鮮純化的菌苔制備0.5麥?zhǔn)蠁挝粷岫染鷳乙?，每支生化管接種0.2 mL菌懸液（同時(shí)接種多管平行），36 ℃培養(yǎng)。每天觀察結(jié)果（觀察結(jié)果時(shí)，滴加靛基質(zhì)試劑1～2滴）。
? 試驗(yàn)結(jié)果如下：
備注：1、“+”紅色；“-”淡黃色。2、CICC10865和CMCC(B)51572為同一菌株在不同菌種保藏中心的不同編號(hào)。
? ? ? ? ?試驗(yàn)結(jié)果如下圖所示：
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36℃培養(yǎng)24 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)48 h
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36℃培養(yǎng)72 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)4 d? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 36℃培養(yǎng)5 d??
? ? ? ? ?為了避免試劑原因造成結(jié)果偏差，我們同時(shí)使用國(guó)內(nèi)三個(gè)不同廠家的色氨酸肉湯（蛋白胨水）進(jìn)行驗(yàn)證，四株福氏志賀氏菌的試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果一致。
? 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，現(xiàn)在我們回答最初的問(wèn)題：
? 1、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗(yàn)確實(shí)是遲緩陽(yáng)性。
? 2、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗(yàn)遲緩陽(yáng)性的培養(yǎng)時(shí)間需要48 h及以上。
? 3、?開(kāi)展志賀氏菌靛基質(zhì)試驗(yàn)，一般培養(yǎng)時(shí)間是18 h～24 h，不超過(guò)48 h。在這個(gè)時(shí)間范圍內(nèi)，福氏志賀氏菌一般都獲得陰性結(jié)果。
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? ? ? ? ?參考文獻(xiàn)：
? ?1、?GB 4789.5－2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》
? ?2、?《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》（第八版）