? ? ? ? 每個檢驗實驗室都應(yīng)當對自己做出的樣品檢測結(jié)果負責(zé),如同每個工廠都會對自己生產(chǎn)的產(chǎn)品負責(zé)。工廠會制定各種質(zhì)控方法和措施去保證產(chǎn)品的各項指標和參數(shù)滿足要求,從而確保產(chǎn)品的品質(zhì)。實驗室自然也會制定各種質(zhì)量監(jiān)控方法去保證檢驗結(jié)果的準確和可靠。
圖A.1 實驗室質(zhì)量監(jiān)控流程圖
? ? ? ?上圖為實驗室質(zhì)量監(jiān)控的流程圖,出自RB/T 038-2020 《食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南》的附錄A,流程圖中涉及的環(huán)節(jié)很多,受篇幅限制,本文重點介紹其中的一個核心環(huán)節(jié),即評價依據(jù),包括流程圖中的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和結(jié)果評價。
對于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方案應(yīng)預(yù)先設(shè)定評價依據(jù),不同評價依據(jù)對應(yīng)不同的測試統(tǒng)計量,并應(yīng)與所策劃的質(zhì)量監(jiān)控方式對應(yīng)。實驗室可自行設(shè)定評價依據(jù),包括但不限于:
a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標微生物的一致性;
b)方法中規(guī)定或?qū)嶒炇彝ㄟ^方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);
c)有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值;
d)控制圖的警示限和控制限;
e)公認值,如同一操作者對同一平板重復(fù)計數(shù),其差異應(yīng)在5%之內(nèi),不同操作者對同一平板重復(fù)計數(shù),其差異應(yīng)在10%之內(nèi);
f)實驗室內(nèi)部的經(jīng)驗值。
以上是常用的評價依據(jù),除了f項的經(jīng)驗值外,我們將逐條給大家介紹。
a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標微生物的一致性
本項適合于定性檢測項目的質(zhì)量監(jiān)控。通常直接將監(jiān)控結(jié)果與指定值進行比較,兩者一致視為“滿意”或“正確”,不一致則視為“不滿意”或“不正確”。比如某實驗室計劃開展沙門氏菌項目的質(zhì)量監(jiān)控,在一個經(jīng)檢驗無沙門氏菌的樣品中人工添加了一定量沙門氏菌標準菌,混勻后使樣品中沙門氏菌含量在10-100CFU/25g。將此自制質(zhì)控樣品讓實驗室進行檢驗,此自制質(zhì)控樣品的指定值就是陽性,如果實驗室檢驗后報告結(jié)果為陽性,那么監(jiān)控結(jié)果與指定值一致,視為“滿意”或“正確”;如果實驗室檢驗后報告結(jié)果為陰性,那么監(jiān)控結(jié)果與指定值不一致,視為“不滿意”或“不正確”。定性檢測項目的評價方式是很直接的,一般不涉及統(tǒng)計量。詳見RB/T 038-2020的7.2.1條。
e)公認值,如同一操作者對同一平板重復(fù)計數(shù),其差異應(yīng)在5%之內(nèi),不同操作者對同一平板重復(fù)計數(shù),其差異應(yīng)在10%之內(nèi);
公認值可以理解為一種行業(yè)內(nèi)的默認值。條款中的舉例是針對定量項目檢驗流程中平板計數(shù)這一個步驟的監(jiān)控。5%和10%就是公認值,此方法可用于內(nèi)部人員比對監(jiān)控方式的評價。
評價依據(jù)的a和e兩項都比較簡單,我們下面重點介紹b,c,d三項。此三項都用于定量檢測項目。
b)方法中規(guī)定或?qū)嶒炇彝ㄟ^方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);
此項是利用標準方法規(guī)定的質(zhì)量指標進行統(tǒng)計分析和評價。實際工作中經(jīng)常利用的指標有三個,分別是重復(fù)性限(r)、加標回收率和置信區(qū)間。在ISO標準體系中,此三個指標都明確給出,可以直接利用。但是國標體系中重復(fù)性限(r)和加標回收兩個指標在微生物檢測方法中很少提及,所以可以直接參考ISO標準指標或自行通過方法驗證獲得。
b.1)重復(fù)性限(r)
以ISO 4833-1-2013《食品鏈微生物學(xué) 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分:30°C傾注平板菌落計數(shù)》為例,此標準提供的指標是以生奶或巴氏殺菌奶為基質(zhì)重復(fù)性限(r)為0.25(log10)。重復(fù)性限(r)是指在同一實驗室,由同一操作人員使用相同的設(shè)備,按相同的測試方法,在短時間內(nèi)對同一被測對象進行的兩次獨立測試結(jié)果對數(shù)值之差不得大于0.25(log10)。也就是說,如果以重復(fù)性限(r)指標進行菌落總數(shù)的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控,那么第一次實驗結(jié)果是1.0×105CFU/g,轉(zhuǎn)log值后為5(log10),根據(jù)重復(fù)性限(r)為0.25(log10)的要求,第二次實驗結(jié)果應(yīng)該在5±0.25(log10),即4.75-5.25(log10)之間。轉(zhuǎn)換為CFU值就是5.6×104-1.8×105CFU/g之間。如果第二次實驗的真實結(jié)果落在此范圍內(nèi),那么本次內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的結(jié)果為“滿意”。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.1條。
b.2)加標回收率
此指標在微生物檢測標準中涉及很少,目前只有ISO 9308-1-2014《水質(zhì)大腸埃希氏菌和大腸菌群計數(shù) 第1部分低背景菌群水的膜過濾法》中有提及,所以本文不再展開詳述。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.2條。
b.3)置信區(qū)間
置信區(qū)間指標主要在最可能數(shù)(MPN)計數(shù)法中提及。在再現(xiàn)性條件下,對樣品進行分析所得重復(fù)測試結(jié)果,如果試驗組結(jié)果在對照組結(jié)果的95%置信區(qū)間內(nèi),則可認為試驗組結(jié)果與對照組結(jié)果沒有顯著性差異。例如:假設(shè)某一對照組人員按照GB4789.3第一法進行大腸菌群測試計數(shù),陽性管數(shù)為3-2-1,查MPN表得到150 MPN,查MPN表又可知其95%置信區(qū)間的上限為420 MPN,下限為37 MPN,那么另一試驗組人員檢測結(jié)果所得MPN值在37~420之間,均可認為試驗組人員的測試結(jié)果與對照組人員的測試結(jié)果沒有顯著性差異。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.3條。
c)有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值;
此項是利用有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值來進行統(tǒng)計分析和評價。其中最推薦的是質(zhì)控樣品。目前國內(nèi)常見質(zhì)控樣品都會提供特性值和特性值區(qū)間。以中國檢科院質(zhì)控樣為例,證書上會提供以下參數(shù),包括特性值、標準差和特性值區(qū)間。
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? ? ? ? 如果用此質(zhì)控樣品進行檢測,只要檢測結(jié)果落在特性值區(qū)間內(nèi),則視為“滿意”。越接近特性值,說明實驗誤差越小。
質(zhì)控樣品特性值區(qū)間是根據(jù)特性值和標準差,利用區(qū)間估計的公式進行計算而得。公式如下:
式中:
CI----置信區(qū)間;
μ0----平均菌落數(shù);
S----標準差;
k----包含因子。
? 以上述截圖的質(zhì)控樣證書為例:大腸埃希氏菌質(zhì)控樣的平均菌落數(shù),也就是特性值為3.022(log10CFU/mL),對應(yīng)菌落數(shù)為1051 CFU/mL,修約后為1100 CFU/mL,標準差為0.483(log10CFU/mL),此數(shù)值應(yīng)該是由log值計算出,所以沒有轉(zhuǎn)換回菌落數(shù)的意義。那么CI=3.022±k×0.483。當k=1時,表示所有測量均值中有68%的值落在2.539 ~3.505(log10CFU/mL)之間;當k=2時,表示所有測量均值中有95%的值落在2.056 ~3.988(log10?CFU/mL)之間,當k=3時,表示所有測量均值中有99.7%的值落在1.573~4.471(log10?CFU/mL)之間。本質(zhì)控樣品選用了k=2, 所有測量均值有95%的值落在2.056 ~3.988(log10?CFU/mL)之間,即菌落數(shù)為110-9700 CFU/mL。這就是特性值區(qū)間的意義。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.4條。
如果質(zhì)控樣品可以提供擴展測量不確定度,并且檢驗實驗室自身已經(jīng)計算過自己實驗室該項目的擴展測量不確定度,則可以利用此類質(zhì)控樣品的信息進行評價。統(tǒng)計量為En值。|En|≤1,表明測量結(jié)果的質(zhì)量得到保證,無需采取進一步措施;|En|>1,表明測量結(jié)果的質(zhì)量失控,宜查找原因并迅速采取糾正措施。由于此統(tǒng)計量使用較少,本文不再展開介紹公式和計算過程。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.5條。
目前在國內(nèi)檢測行業(yè)中將質(zhì)控樣品直接用于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的情況最為常見,一般質(zhì)控樣品也直接提供特性值和特性值區(qū)間,無需檢測實驗室自行計算置信區(qū)間。所以檢測實驗室直接購買質(zhì)控樣品是最省時省力的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方式。
d)控制圖的警示限和控制限;
d項是利用控制圖進行統(tǒng)計分析及評價。在室內(nèi)再現(xiàn)性條件下,食品微生物檢測數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布時,可使用控制圖進行質(zhì)量監(jiān)控。以代表時間或順序抽取的樣品號為橫坐標,以代表質(zhì)量水平的特征值為縱坐標,繪制控制圖。通常使用單值-移動極差控制圖(X-Rm控制圖)監(jiān)控菌落計數(shù)結(jié)果的準確性和精密度,也可用于監(jiān)控MPN法計數(shù)結(jié)果。構(gòu)建單值-移動極差控制圖(X-Rm控制圖)時原則上需要20個以上測試數(shù)據(jù)。宜在日常檢測過程中檢測相應(yīng)的質(zhì)量監(jiān)控樣品。將質(zhì)控數(shù)據(jù)處理后,按時間順序繪制在建立好的控制圖上。下列任何一種情況是不能接受的,過程可能失控:
a)一個或多個連續(xù)值超出“控制限”;
b)連續(xù)3次觀察中有兩次超過同一“警示限”;
c)連續(xù)9次觀測值在平均值的同一側(cè);
d)連續(xù)6次觀測值穩(wěn)步上升或下降。
一旦識別出失控,應(yīng)立即進行不符合調(diào)查,采取適當?shù)娘L(fēng)險應(yīng)對措施。
控制圖適合連續(xù)監(jiān)控,平時使用較少,本文不再展開計算過程,僅展示某次實驗的X-Rm控制圖供大家參考。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.7條。
以上就是本文給大家介紹的幾種內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的評價依據(jù),其中a項適合定性項目,e項比較簡單直觀。b、c、d三項是用于定量項目監(jiān)控比較多的評價依據(jù),其中b和c項又各自有幾種不同的評價依據(jù),各位檢測行業(yè)的老師可以根據(jù)自己實驗室的實際情況進行選擇。一般情況下,選擇市售合格的質(zhì)控樣品,直接參考證書給出的特性值和特性值范圍進行評價是最簡單的辦法。
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參考文獻:
1、RB/T 038-2020 食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南
2、ISO 4833-1-2013食品鏈微生物學(xué) 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分:30°C傾注平板菌落計數(shù)