培養(yǎng)基的適用性檢查是確定培養(yǎng)基質(zhì)量及保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果正確的前提，因此如何高效完成培養(yǎng)基適用性檢查成為實(shí)驗(yàn)室關(guān)注的重點(diǎn)。那么，今天我和大家一起梳理、探討無菌檢查法中培養(yǎng)基適用性檢查的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及注意事項(xiàng)。
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無菌檢查法測試用培養(yǎng)基
中國藥典2020版四部1101無菌檢查法采用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(FTM）和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）作為主要測試培養(yǎng)基，其中TSB替代了2010版的改良馬丁培養(yǎng)基，這兩種培養(yǎng)基在促微生物生長能力和微生物生長種群的廣泛性上無顯著性差異，但TSB在培養(yǎng)霉菌方面略優(yōu)于改良馬丁培養(yǎng)基，并且TSB的pH值為7.3±0.2，相較于改良馬丁培養(yǎng)基的pH值6.4±0.2，TSB更適宜微生物的生長。
藥典明確了FTM和TSB這兩種培養(yǎng)基的適用范圍：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基是厭氧菌檢查的首選培養(yǎng)基，同時(shí)也可用于需氧菌檢查；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基適用于真菌和需氧菌檢查。即產(chǎn)品中可能存在的需氧菌無論被接種到哪種培養(yǎng)基中都能被檢出。
兩種培養(yǎng)基的成分與作用見下圖：
培養(yǎng)基的適用性檢查
1101無菌檢查法所用培養(yǎng)基適用性檢查包括無菌性檢查與靈敏度檢查。
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? ? ? ?1、無菌性檢查
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：每批培養(yǎng)基一般隨機(jī)取不少于5支（瓶），放置在每種培養(yǎng)基規(guī)定的溫度下培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。
注意：該部分實(shí)驗(yàn)意義在于證明測試所用培養(yǎng)基的無菌性，若無菌檢查測試中有菌檢出，考慮菌來源于他處。如果培養(yǎng)14天后仍然不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取至少1mL該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至同種新鮮的培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)4天觀察結(jié)果。
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? ? ? ?2、靈敏度檢查
1）菌種
培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存和確認(rèn)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。
注意：在9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中對于菌種的要求“必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)”，在做確認(rèn)時(shí)，可以是劃線平板觀察菌落形態(tài)，也可以做革蘭氏染色、生化鑒定等。
2）培養(yǎng)基接種
取適宜裝量的FTM 7支，分別接種不大于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照；取適宜裝量的TSB 7支，分別接種不大于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照。接種細(xì)菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不超過3天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不得超過5天。
注意：該部分實(shí)驗(yàn)意義在于證明所用培養(yǎng)基的靈敏度足以檢出產(chǎn)品中可能污染的微生物。2020版藥典中對于培養(yǎng)基的裝量沒有強(qiáng)制要求，可以參照前一版藥典中的裝量要求進(jìn)行配制，即FTM每管裝量為12mL/支，TSB每管裝量為9mL/支。但需要注意，F(xiàn)TM的裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/3。
標(biāo)準(zhǔn)要求接種菌量不大于100CFU，測試時(shí)需同步進(jìn)行涂布，對具體加菌量進(jìn)行計(jì)數(shù)。
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3）結(jié)果判定
空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。
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? ?? ?4）靈敏度檢查結(jié)果（圖示）
其他注意事項(xiàng)
為保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基的購買應(yīng)有計(jì)劃，并對培養(yǎng)基進(jìn)行外觀檢查，指標(biāo)包括容器密閉性檢查、內(nèi)容物的感官檢查等。培養(yǎng)基開瓶時(shí)應(yīng)記錄首次開封日期，開封后的脫水合成培養(yǎng)基，其質(zhì)量取決于貯存條件。通過觀察粉末的流動(dòng)性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷脫水培養(yǎng)基的質(zhì)量的變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。
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參考資料：
1、中華人民共和國藥典 2020年版 四部
2、GB4789.28-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求
3、中國藥典分析檢測技術(shù)指南