引言
近年來,檢測行業(yè)中維生素項目的檢驗日益增多。大家在面對維生素復(fù)雜的操作過程時遇到了各種各樣的問題,包括樣品稱樣量的計算、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方式的選擇、樣品稀釋倍數(shù)的選擇、標(biāo)準(zhǔn)菌的活化等等。其中最讓大家頭疼的一個情況是標(biāo)準(zhǔn)曲線整體渾濁。造成標(biāo)曲整體渾濁的原因是多種多樣的,但是今年我們又發(fā)現(xiàn)了一個更隱秘的影響因素,現(xiàn)分享給大家,希望大家能避免標(biāo)曲整體渾濁,保證實驗順利進行。
想戰(zhàn)勝你的敵人,就要了解你的敵人。維生素的難點到底在哪兒呢?其實維生素項目的難點很多,還很細(xì)。追究其核心,主要是因為維生素的含量很低,低到非常容易受到其他因素的干擾。而且這些干擾因素,看不見,摸不著,一個不留神,我們就被偷襲了。結(jié)果就是這樣:
看到此圖時,大部分實驗員估計已經(jīng)心生絕望,幾天的辛苦又將付諸東流。所以大部人的反應(yīng)都是趕緊拿遠(yuǎn)點,我再也不想多看它一眼。
但是,這是不對的呦!
我們應(yīng)該積極面對問題,盯著這個標(biāo)曲,然后思考。它為啥這么渾濁呢?為啥沒有梯度呢?為啥標(biāo)曲設(shè)定的時候要有接種空白和不接種空白呢?好了,你接近真相了!
但是,其實,捷徑就在眼前。我們?yōu)槭裁床蝗y測那套渾濁的標(biāo)準(zhǔn)試驗管呢?哪怕我們需要壓抑住自己內(nèi)心抗拒的波瀾。
一、如果我們測出來結(jié)果是這樣的(編撰數(shù)據(jù)):
二、如果我們測出來結(jié)果是這樣的(編撰數(shù)據(jù)):
GB 5009.210-2016?《食品中泛酸的測定》6.7條款“如果0對照管有明顯的細(xì)菌增長,或者與0對照管相比,標(biāo)準(zhǔn)0管透光率在90%以下(或吸光度值在0.2以上;或標(biāo)準(zhǔn)系列管透光率最大變化量<40%(或吸光度值變化量<0.4),說明可能有雜菌或不明來源的泛酸混入,需重做試驗)”
那么可能的污染源是啥呢?前文提到了:所有玻璃器皿的潔凈度;槍頭或移液器的潔凈度;環(huán)境的潔凈度;標(biāo)品配制的準(zhǔn)確性及稀釋過程的準(zhǔn)確性等等。不過,最近小編還發(fā)現(xiàn)了一個更隱秘的維生素污染源----接種液。
我們維生素試驗用到的接種液在接種前都是經(jīng)過特別處理后,去除菌液中殘存維生素的。比如葉酸通過“饑餓”培養(yǎng)6小時來清除菌液中殘存葉酸。泛酸、生物素和維生素B12都是通過“離心-洗脫”三次來去除接種液中殘存維生素。但是,當(dāng)我們操作不當(dāng)時會造成接種液中殘存維生素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過方法的去除能力,導(dǎo)致接種液中帶入維生素,從而污染體系,導(dǎo)致維生素本底污染,干擾維生素測定。
比如:葉酸菌株活化時我們沒有使用標(biāo)準(zhǔn)要求的4mL葉酸測定培養(yǎng)基加2mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液,而選用了乳酸桿菌肉湯或MRS肉湯進行活化。那結(jié)局是很慘痛的,小編自己也深有體會。
再比如:生物素和維生素B12菌株活化時使用的乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中的番茄汁配制不合規(guī),那也會引起維生素本底的污染。最近小編就碰到了好幾個案例,由于維生素標(biāo)準(zhǔn)中未明確番茄汁的配制方法,所以不少實驗員就用了最直接的思路:番茄整個榨汁。這種番茄汁配制后濃度太高,維生素殘留量太大,超過了離心洗脫能處理的范圍,所以配制后的情況就如下圖所示。
GB 4789.34-2016?《雙歧桿菌檢驗》A.1.2.2條款:“西紅柿浸出液的制備:將新鮮的西紅柿洗凈后稱重切碎,加等量的蒸餾水在100℃水浴中加熱,攪拌90min,然后用紗布過濾,校正pH 7.0±0.1,將浸出液分裝后,121℃高壓滅菌15min-20min?!?/span>
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