GB 15979《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》發(fā)布于1996年，最新一版更新于2002年，隨著今年新型冠狀病毒疫情的侵襲，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)廣受關(guān)注，而標(biāo)準(zhǔn)里對于綠膿桿菌的檢測是很多檢驗(yàn)人員關(guān)注和有所疑惑的。在這里，小王就這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)里對綠膿桿菌檢測的相關(guān)要點(diǎn)和大家分享一下。
一、綠膿桿菌簡介
首先，我們先了解下綠膿桿菌。
綠膿桿菌，又稱銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginosa)，1882年由Gersard從傷口膿液中分離，是一種革蘭氏陰性、好氧、呈長棒形的細(xì)菌，因感染后膿汁和浸出液等病料呈綠色，故此得名。
該菌最適宜的生長溫度為30℃-37℃，42℃能生長，4℃不生長。大多數(shù)菌株能產(chǎn)生水溶性的綠膿菌素和熒光色素，可向培養(yǎng)基周圍擴(kuò)散而呈現(xiàn)藍(lán)綠色，某些菌株也分泌一些暗紅色素（具體可參考GB 8538-2016中對于銅綠假單胞菌可疑菌落鑒定的相關(guān)內(nèi)容）。?
綠膿桿菌的革蘭氏染色鏡檢照片
二、綠膿桿菌檢驗(yàn)流程
接下來，我們來看一下GB 15979《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中關(guān)于綠膿桿菌的檢驗(yàn)流程：
第一步中，5mL樣液加入到50mL SCDLP培養(yǎng)液中，35℃±2℃培養(yǎng)18h-24h。由于綠膿桿菌是需氧菌，所以在培養(yǎng)液表面生長旺盛，會(huì)形成一層薄菌膜，培養(yǎng)液呈黃綠色或藍(lán)綠色。這點(diǎn)是很容易做到和看到的。
但第二步中，標(biāo)準(zhǔn)中描述：
其實(shí)，“挑取菌膜處的培養(yǎng)物劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂，培養(yǎng)后觀察其菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色”這一現(xiàn)象，很多檢驗(yàn)人員都反饋看不到所謂的粉紅色。小王用樣品中分離的綠膿桿菌劃線了十六烷三甲基溴化銨瓊脂，平板現(xiàn)象如下：
從圖中可以看出，十六烷三甲基溴化銨瓊脂上的菌落周圍沒有出現(xiàn)粉紅色，鑒于GB 8538-2016飲用天然礦泉水檢測方法中對綠膿桿菌菌落形態(tài)的描述有藍(lán)綠色、紅褐色等多種顏色，小王認(rèn)為，即便劃線后培養(yǎng)基沒有所謂的粉紅色，也依然要繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)的生化鑒定。因?yàn)槎鄶?shù)研究表明，綠膿桿菌所產(chǎn)色素的顏色和培養(yǎng)基的成分相關(guān)。
三、綠膿菌素生化實(shí)驗(yàn)
在后續(xù)的生化鑒定實(shí)驗(yàn)中，小王認(rèn)為操作上存在難度的，就是綠膿菌素實(shí)驗(yàn)了。那咱們就先看下標(biāo)準(zhǔn)中是如何對此實(shí)驗(yàn)進(jìn)行描述的：
從標(biāo)準(zhǔn)中可以看出，加三氯甲烷后的操作只有充分振蕩，而實(shí)際操作中，直接振蕩的效果很差，即便是用接種環(huán)把上面的菌苔刮取后振蕩，效果也依舊不佳。請看下圖：
所以，各位小伙伴們在做此實(shí)驗(yàn)時(shí)候，就可以借鑒小王的操作啦！
至于其他生化實(shí)驗(yàn)，小王還是相信各位水平的，如果依然有不太明白的，那就聯(lián)系陸橋技術(shù)小王！隨時(shí)恭候您的提問。
參考文獻(xiàn)
1.韓青松, 簡永利, 涂宜強(qiáng),等. 綠膿桿菌研究進(jìn)展[J]. 畜牧與飼料科學(xué), 2012(01):128-130.
2.GB 15979-2002?一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].
3.GB 8538-2016?食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)?飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法[S].