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福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論

發(fā)布時間: 2024-10-22

? ?靛基質(zhì)試驗(indole test)是微生物檢驗的常用生化鑒定項目。反應(yīng)原理是:蛋白胨中的色氨酸被細(xì)菌產(chǎn)生的色氨酸酶水解,產(chǎn)生吲哚,在加入對二甲氨基苯甲醛試劑(靛基質(zhì)試劑)后,與之作用生成醌類結(jié)構(gòu)的玫瑰紅色物質(zhì)。


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論


? ? ? ? 最近有很多小伙伴咨詢小編關(guān)于志賀氏菌檢驗中靛基質(zhì)試驗的問題。在GB 4789.5-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗》中,關(guān)于志賀氏菌的生化描述如下:


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論



? 其中的靛基質(zhì)試驗除D群宋內(nèi)氏志賀氏菌為明確陰性結(jié)果外,其他志賀氏菌為多數(shù)陰性或者遲緩陽性,其中對于福氏志賀氏菌描述為遲緩陽性。

? ? ? ? GB 4789.5-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗》附錄A中,對于試驗方法是這樣描述的:


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論

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? ?靛基質(zhì)試驗,本來是挺簡單的一個生化鑒定項目,但是大多數(shù)小伙伴都會糾結(jié):志賀氏菌這個靛基質(zhì)試驗究竟該培養(yǎng)多久?這個必要時,是什么意思?

?《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》(第八版)中描述“福氏志賀氏菌血清型6不產(chǎn)生吲哚,另外一些血清型產(chǎn)生吲哚不穩(wěn)定”。


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論



? ?因此大家對于“不穩(wěn)定”、“遲緩陽性”這些描述有以下疑慮:


? 1、是否多數(shù)福氏志賀氏菌都是遲緩陽性?

? 2、遲緩陽性需要培養(yǎng)多長時間會出現(xiàn)陽性反應(yīng)?

? 3、按照成品生化試劑培養(yǎng)時間進(jìn)行培養(yǎng)是陽性還是陰性?


? 帶著這些問題,小編進(jìn)行了相應(yīng)的驗證試驗,從試驗中尋找這些問題的答案。


? 我們使用不同菌種保藏中心的四株福氏志賀氏菌進(jìn)行試驗。用平板上新鮮純化的菌苔制備0.5麥?zhǔn)蠁挝粷岫染鷳乙?,每支生化管接種0.2 mL菌懸液(同時接種多管平行),36 ℃培養(yǎng)。每天觀察結(jié)果(觀察結(jié)果時,滴加靛基質(zhì)試劑1~2滴)。


? 試驗結(jié)果如下:

福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論

備注:1、“+”紅色;“-”淡黃色。2、CICC10865和CMCC(B)51572為同一菌株在不同菌種保藏中心的不同編號。


? ? ? ? ?試驗結(jié)果如下圖所示:


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論? ?福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論

36℃培養(yǎng)24 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)48 h


福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論? ?福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論? ?福氏志賀氏菌“靛基質(zhì)試驗”的結(jié)果討論

36℃培養(yǎng)72 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)4 d? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 36℃培養(yǎng)5 d??



? ? ? ? ?為了避免試劑原因造成結(jié)果偏差,我們同時使用國內(nèi)三個不同廠家的色氨酸肉湯(蛋白胨水)進(jìn)行驗證,四株福氏志賀氏菌的試驗結(jié)果與上述結(jié)果一致。


? 根據(jù)試驗結(jié)果,現(xiàn)在我們回答最初的問題:


? 1、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗確實是遲緩陽性。

? 2、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗遲緩陽性的培養(yǎng)時間需要48 h及以上。

? 3、?開展志賀氏菌靛基質(zhì)試驗,一般培養(yǎng)時間是18 h~24 h,不超過48 h。在這個時間范圍內(nèi),福氏志賀氏菌一般都獲得陰性結(jié)果。

?


? ? ? ? ?參考文獻(xiàn):

? ?1、?GB 4789.5-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗》

? ?2、?《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》(第八版)


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