? ? ? ? 每個(gè)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)當(dāng)對(duì)自己做出的樣品檢測(cè)結(jié)果負(fù)責(zé),如同每個(gè)工廠都會(huì)對(duì)自己生產(chǎn)的產(chǎn)品負(fù)責(zé)。工廠會(huì)制定各種質(zhì)控方法和措施去保證產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)和參數(shù)滿足要求,從而確保產(chǎn)品的品質(zhì)。實(shí)驗(yàn)室自然也會(huì)制定各種質(zhì)量監(jiān)控方法去保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。
圖A.1 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控流程圖
? ? ? ?上圖為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控的流程圖,出自RB/T 038-2020 《食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南》的附錄A,流程圖中涉及的環(huán)節(jié)很多,受篇幅限制,本文重點(diǎn)介紹其中的一個(gè)核心環(huán)節(jié),即評(píng)價(jià)依據(jù),包括流程圖中的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和結(jié)果評(píng)價(jià)。
對(duì)于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方案應(yīng)預(yù)先設(shè)定評(píng)價(jià)依據(jù),不同評(píng)價(jià)依據(jù)對(duì)應(yīng)不同的測(cè)試統(tǒng)計(jì)量,并應(yīng)與所策劃的質(zhì)量監(jiān)控方式對(duì)應(yīng)。實(shí)驗(yàn)室可自行設(shè)定評(píng)價(jià)依據(jù),包括但不限于:
a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標(biāo)微生物的一致性;
b)方法中規(guī)定或?qū)嶒?yàn)室通過(guò)方法驗(yàn)證所獲得的質(zhì)量指標(biāo)(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);
c)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值;
d)控制圖的警示限和控制限;
e)公認(rèn)值,如同一操作者對(duì)同一平板重復(fù)計(jì)數(shù),其差異應(yīng)在5%之內(nèi),不同操作者對(duì)同一平板重復(fù)計(jì)數(shù),其差異應(yīng)在10%之內(nèi);
f)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的經(jīng)驗(yàn)值。
以上是常用的評(píng)價(jià)依據(jù),除了f項(xiàng)的經(jīng)驗(yàn)值外,我們將逐條給大家介紹。
a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標(biāo)微生物的一致性
本項(xiàng)適合于定性檢測(cè)項(xiàng)目的質(zhì)量監(jiān)控。通常直接將監(jiān)控結(jié)果與指定值進(jìn)行比較,兩者一致視為“滿意”或“正確”,不一致則視為“不滿意”或“不正確”。比如某實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃開(kāi)展沙門(mén)氏菌項(xiàng)目的質(zhì)量監(jiān)控,在一個(gè)經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)沙門(mén)氏菌的樣品中人工添加了一定量沙門(mén)氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌,混勻后使樣品中沙門(mén)氏菌含量在10-100CFU/25g。將此自制質(zhì)控樣品讓實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn),此自制質(zhì)控樣品的指定值就是陽(yáng)性,如果實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后報(bào)告結(jié)果為陽(yáng)性,那么監(jiān)控結(jié)果與指定值一致,視為“滿意”或“正確”;如果實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后報(bào)告結(jié)果為陰性,那么監(jiān)控結(jié)果與指定值不一致,視為“不滿意”或“不正確”。定性檢測(cè)項(xiàng)目的評(píng)價(jià)方式是很直接的,一般不涉及統(tǒng)計(jì)量。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.1條。
e)公認(rèn)值,如同一操作者對(duì)同一平板重復(fù)計(jì)數(shù),其差異應(yīng)在5%之內(nèi),不同操作者對(duì)同一平板重復(fù)計(jì)數(shù),其差異應(yīng)在10%之內(nèi);
公認(rèn)值可以理解為一種行業(yè)內(nèi)的默認(rèn)值。條款中的舉例是針對(duì)定量項(xiàng)目檢驗(yàn)流程中平板計(jì)數(shù)這一個(gè)步驟的監(jiān)控。5%和10%就是公認(rèn)值,此方法可用于內(nèi)部人員比對(duì)監(jiān)控方式的評(píng)價(jià)。
評(píng)價(jià)依據(jù)的a和e兩項(xiàng)都比較簡(jiǎn)單,我們下面重點(diǎn)介紹b,c,d三項(xiàng)。此三項(xiàng)都用于定量檢測(cè)項(xiàng)目。
b)方法中規(guī)定或?qū)嶒?yàn)室通過(guò)方法驗(yàn)證所獲得的質(zhì)量指標(biāo)(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);
此項(xiàng)是利用標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)。實(shí)際工作中經(jīng)常利用的指標(biāo)有三個(gè),分別是重復(fù)性限(r)、加標(biāo)回收率和置信區(qū)間。在ISO標(biāo)準(zhǔn)體系中,此三個(gè)指標(biāo)都明確給出,可以直接利用。但是國(guó)標(biāo)體系中重復(fù)性限(r)和加標(biāo)回收兩個(gè)指標(biāo)在微生物檢測(cè)方法中很少提及,所以可以直接參考ISO標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)或自行通過(guò)方法驗(yàn)證獲得。
b.1)重復(fù)性限(r)
以ISO 4833-1-2013《食品鏈微生物學(xué) 微生物計(jì)數(shù)的水平方法 第1部分:30°C傾注平板菌落計(jì)數(shù)》為例,此標(biāo)準(zhǔn)提供的指標(biāo)是以生奶或巴氏殺菌奶為基質(zhì)重復(fù)性限(r)為0.25(log10)。重復(fù)性限(r)是指在同一實(shí)驗(yàn)室,由同一操作人員使用相同的設(shè)備,按相同的測(cè)試方法,在短時(shí)間內(nèi)對(duì)同一被測(cè)對(duì)象進(jìn)行的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果對(duì)數(shù)值之差不得大于0.25(log10)。也就是說(shuō),如果以重復(fù)性限(r)指標(biāo)進(jìn)行菌落總數(shù)的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控,那么第一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果是1.0×105CFU/g,轉(zhuǎn)log值后為5(log10),根據(jù)重復(fù)性限(r)為0.25(log10)的要求,第二次實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)該在5±0.25(log10),即4.75-5.25(log10)之間。轉(zhuǎn)換為CFU值就是5.6×104-1.8×105CFU/g之間。如果第二次實(shí)驗(yàn)的真實(shí)結(jié)果落在此范圍內(nèi),那么本次內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的結(jié)果為“滿意”。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.1條。
b.2)加標(biāo)回收率
此指標(biāo)在微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中涉及很少,目前只有ISO 9308-1-2014《水質(zhì)大腸埃希氏菌和大腸菌群計(jì)數(shù) 第1部分低背景菌群水的膜過(guò)濾法》中有提及,所以本文不再展開(kāi)詳述。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.2條。
b.3)置信區(qū)間
置信區(qū)間指標(biāo)主要在最可能數(shù)(MPN)計(jì)數(shù)法中提及。在再現(xiàn)性條件下,對(duì)樣品進(jìn)行分析所得重復(fù)測(cè)試結(jié)果,如果試驗(yàn)組結(jié)果在對(duì)照組結(jié)果的95%置信區(qū)間內(nèi),則可認(rèn)為試驗(yàn)組結(jié)果與對(duì)照組結(jié)果沒(méi)有顯著性差異。例如:假設(shè)某一對(duì)照組人員按照GB4789.3第一法進(jìn)行大腸菌群測(cè)試計(jì)數(shù),陽(yáng)性管數(shù)為3-2-1,查MPN表得到150 MPN,查MPN表又可知其95%置信區(qū)間的上限為420 MPN,下限為37 MPN,那么另一試驗(yàn)組人員檢測(cè)結(jié)果所得MPN值在37~420之間,均可認(rèn)為試驗(yàn)組人員的測(cè)試結(jié)果與對(duì)照組人員的測(cè)試結(jié)果沒(méi)有顯著性差異。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.3條。
c)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值;
此項(xiàng)是利用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)。其中最推薦的是質(zhì)控樣品。目前國(guó)內(nèi)常見(jiàn)質(zhì)控樣品都會(huì)提供特性值和特性值區(qū)間。以中國(guó)檢科院質(zhì)控樣為例,證書(shū)上會(huì)提供以下參數(shù),包括特性值、標(biāo)準(zhǔn)差和特性值區(qū)間。
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? ? ? ? 如果用此質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測(cè),只要檢測(cè)結(jié)果落在特性值區(qū)間內(nèi),則視為“滿意”。越接近特性值,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)誤差越小。
質(zhì)控樣品特性值區(qū)間是根據(jù)特性值和標(biāo)準(zhǔn)差,利用區(qū)間估計(jì)的公式進(jìn)行計(jì)算而得。公式如下:
式中:
CI----置信區(qū)間;
μ0----平均菌落數(shù);
S----標(biāo)準(zhǔn)差;
k----包含因子。
? 以上述截圖的質(zhì)控樣證書(shū)為例:大腸埃希氏菌質(zhì)控樣的平均菌落數(shù),也就是特性值為3.022(log10CFU/mL),對(duì)應(yīng)菌落數(shù)為1051 CFU/mL,修約后為1100 CFU/mL,標(biāo)準(zhǔn)差為0.483(log10CFU/mL),此數(shù)值應(yīng)該是由log值計(jì)算出,所以沒(méi)有轉(zhuǎn)換回菌落數(shù)的意義。那么CI=3.022±k×0.483。當(dāng)k=1時(shí),表示所有測(cè)量均值中有68%的值落在2.539 ~3.505(log10CFU/mL)之間;當(dāng)k=2時(shí),表示所有測(cè)量均值中有95%的值落在2.056 ~3.988(log10?CFU/mL)之間,當(dāng)k=3時(shí),表示所有測(cè)量均值中有99.7%的值落在1.573~4.471(log10?CFU/mL)之間。本質(zhì)控樣品選用了k=2, 所有測(cè)量均值有95%的值落在2.056 ~3.988(log10?CFU/mL)之間,即菌落數(shù)為110-9700 CFU/mL。這就是特性值區(qū)間的意義。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.4條。
如果質(zhì)控樣品可以提供擴(kuò)展測(cè)量不確定度,并且檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室自身已經(jīng)計(jì)算過(guò)自己實(shí)驗(yàn)室該項(xiàng)目的擴(kuò)展測(cè)量不確定度,則可以利用此類質(zhì)控樣品的信息進(jìn)行評(píng)價(jià)。統(tǒng)計(jì)量為En值。|En|≤1,表明測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量得到保證,無(wú)需采取進(jìn)一步措施;|En|>1,表明測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量失控,宜查找原因并迅速采取糾正措施。由于此統(tǒng)計(jì)量使用較少,本文不再展開(kāi)介紹公式和計(jì)算過(guò)程。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.5條。
目前在國(guó)內(nèi)檢測(cè)行業(yè)中將質(zhì)控樣品直接用于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的情況最為常見(jiàn),一般質(zhì)控樣品也直接提供特性值和特性值區(qū)間,無(wú)需檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室自行計(jì)算置信區(qū)間。所以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室直接購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控樣品是最省時(shí)省力的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方式。
d)控制圖的警示限和控制限;
d項(xiàng)是利用控制圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及評(píng)價(jià)。在室內(nèi)再現(xiàn)性條件下,食品微生物檢測(cè)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布時(shí),可使用控制圖進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。以代表時(shí)間或順序抽取的樣品號(hào)為橫坐標(biāo),以代表質(zhì)量水平的特征值為縱坐標(biāo),繪制控制圖。通常使用單值-移動(dòng)極差控制圖(X-Rm控制圖)監(jiān)控菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度,也可用于監(jiān)控MPN法計(jì)數(shù)結(jié)果。構(gòu)建單值-移動(dòng)極差控制圖(X-Rm控制圖)時(shí)原則上需要20個(gè)以上測(cè)試數(shù)據(jù)。宜在日常檢測(cè)過(guò)程中檢測(cè)相應(yīng)的質(zhì)量監(jiān)控樣品。將質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)處理后,按時(shí)間順序繪制在建立好的控制圖上。下列任何一種情況是不能接受的,過(guò)程可能失控:
a)一個(gè)或多個(gè)連續(xù)值超出“控制限”;
b)連續(xù)3次觀察中有兩次超過(guò)同一“警示限”;
c)連續(xù)9次觀測(cè)值在平均值的同一側(cè);
d)連續(xù)6次觀測(cè)值穩(wěn)步上升或下降。
一旦識(shí)別出失控,應(yīng)立即進(jìn)行不符合調(diào)查,采取適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)應(yīng)對(duì)措施。
控制圖適合連續(xù)監(jiān)控,平時(shí)使用較少,本文不再展開(kāi)計(jì)算過(guò)程,僅展示某次實(shí)驗(yàn)的X-Rm控制圖供大家參考。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.7條。
以上就是本文給大家介紹的幾種內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的評(píng)價(jià)依據(jù),其中a項(xiàng)適合定性項(xiàng)目,e項(xiàng)比較簡(jiǎn)單直觀。b、c、d三項(xiàng)是用于定量項(xiàng)目監(jiān)控比較多的評(píng)價(jià)依據(jù),其中b和c項(xiàng)又各自有幾種不同的評(píng)價(jià)依據(jù),各位檢測(cè)行業(yè)的老師可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況進(jìn)行選擇。一般情況下,選擇市售合格的質(zhì)控樣品,直接參考證書(shū)給出的特性值和特性值范圍進(jìn)行評(píng)價(jià)是最簡(jiǎn)單的辦法。
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參考文獻(xiàn):
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2、ISO 4833-1-2013食品鏈微生物學(xué) 微生物計(jì)數(shù)的水平方法 第1部分:30°C傾注平板菌落計(jì)數(shù)