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GB4789.4-202*《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》征求意見(jiàn)稿和2023版《國(guó)家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》[1],最大的變動(dòng)之一是將SC更換為RVS。 RVS作為一個(gè)新的培養(yǎng)基被列入了食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)行列,但GB4789.28-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基與試劑的質(zhì)量要求》[2]及其征求意見(jiàn)稿中均未列入該培養(yǎng)基,如何對(duì)其進(jìn)行質(zhì)控?各廠家的RVS增菌效果是否相同?對(duì)此,我們做了相關(guān)驗(yàn)證。
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RVS肉湯的原理
培養(yǎng)基中大豆胨提供菌體細(xì)胞生長(zhǎng)所需的碳源、氮源等;氯鹽可以提高培養(yǎng)基體系的滲透壓,磷酸鹽作為緩沖體系維持培養(yǎng)基酸性環(huán)境(pH 5.2±0.2),孔雀綠可以抑制非沙門氏菌屬細(xì)菌的生長(zhǎng)。該培養(yǎng)基的選擇性表現(xiàn)在高滲透壓、低pH值以及孔雀綠的抑菌效果[3]。
圖:3:RVS肉湯
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RVS肉湯的質(zhì)控方法及比對(duì)結(jié)果
對(duì)比國(guó)內(nèi)外5個(gè)廠家(A?B C D E,其中A為陸橋)的RVS增菌液,按照GB 4789.28-2013 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》附錄D中SC增菌液的質(zhì)控方法,對(duì)RVS增菌液進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果無(wú)顯著性差異。
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RVS肉湯的進(jìn)一步驗(yàn)證
各廠家RVS增菌液質(zhì)控結(jié)果無(wú)顯著性差異,是否在實(shí)際檢驗(yàn)中增菌效果就一致呢?樣品中通常含有大量的雜菌,我們模擬實(shí)際檢測(cè)將非目標(biāo)菌含量提高,參考質(zhì)控方法,選用不同血清型的沙門氏菌與大腸埃希氏菌ATCC25922混合。選擇低于標(biāo)準(zhǔn)要求的16h和標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)的20h,觀察增菌速度和增菌效果,開(kāi)展了進(jìn)一步的驗(yàn)證試驗(yàn)。
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實(shí)驗(yàn)方法:
不同血清型的沙門氏菌(接種量小于50CFU)與大腸埃希氏菌ATCC25922?(接種量為106CFU)混合后接種RVS增菌液,于42℃±1℃培養(yǎng),分別于16h和20h取增菌液,稀釋到適宜濃度后轉(zhuǎn)接到沙門氏菌顯色(SA)(陸橋二代)平板上進(jìn)行計(jì)數(shù),觀察目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)情況。在SA培養(yǎng)基上,目標(biāo)菌沙門氏菌呈紫紅色,大腸埃希氏菌為無(wú)色。
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菌株信息:
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結(jié)果:?
對(duì)于ATCC14028,CMCC(B)50976和CICC25045,廠家A和廠家D對(duì)目標(biāo)菌的增菌效果最優(yōu),廠家A、D、E的抑制性最優(yōu)。(見(jiàn)附錄1?以ATCC14028為例)
對(duì)于ATCC29934,ATCC12325,CMCC50115和ATCC13076,廠家A對(duì)目標(biāo)菌增菌效果最優(yōu),廠家A和D的抑制性最優(yōu)。(見(jiàn)附錄2?以ATCC12325為例)
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結(jié)論:
由多個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出,綜合7株沙門氏菌的增菌效果和大腸埃希氏菌的抑制性,廠家A(陸橋)最佳。廠家A(陸橋)可較好的抑制非目標(biāo)菌--大腸埃希氏菌的生長(zhǎng),有效避免了其對(duì)沙門氏菌產(chǎn)生的競(jìng)爭(zhēng)性抑制,同時(shí)能夠保證目標(biāo)菌沙門氏菌良好的促生長(zhǎng)能力。
? 廠家B和廠家C的表現(xiàn)基本一致,主要是抑制性較差,按照該實(shí)驗(yàn)方法,7次混菌實(shí)驗(yàn)都有大量非目標(biāo)菌的生長(zhǎng),這會(huì)增加日常檢測(cè)的工作量,且對(duì)于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種存在漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。
? 廠家D的表現(xiàn)與廠家A相似,但是對(duì)于腸沙門氏菌腸亞種鼠傷寒血清型CMCC(B)50115和腸道沙門氏菌亞種ATCC13076生長(zhǎng)較差,對(duì)于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種ATCC29934和ATCC12325的增菌速度慢且數(shù)量少,也存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)。
廠家E的主要問(wèn)題是對(duì)大多數(shù)目標(biāo)菌的增菌能力較弱,有時(shí)會(huì)低其他廠家1個(gè)數(shù)量級(jí)。
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附錄1:
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圖4:培養(yǎng)16h,5個(gè)廠家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長(zhǎng)情況,涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
圖5:培養(yǎng)20h,5個(gè)廠家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長(zhǎng)情況,涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
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附錄2:
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圖6:廠家A(陸橋)在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(zhǎng)情況
圖7:廠家B在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(zhǎng)情況
圖8:廠家C在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(zhǎng)情況
圖9:廠家D在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(zhǎng)情況
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圖10:廠家E在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(zhǎng)情況
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附錄:3
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參考文獻(xiàn)
[1]2023年國(guó)家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)[S]
[2]?GB4789.28-2013,《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基與試劑的檢查要求》[S]
[3]李瑾,劉振,何艷玲.微生物干粉培養(yǎng)基質(zhì)控圖解手冊(cè)[M].北京科學(xué)技術(shù)出版社,2007.