引言

近年來，檢測行業(yè)中維生素項目的檢驗日益增多。大家在面對維生素復雜的操作過程時遇到了各種各樣的問題，包括樣品稱樣量的計算、標準曲線擬合方式的選擇、樣品稀釋倍數(shù)的選擇、標準菌的活化等等。其中最讓大家頭疼的一個情況是標準曲線整體渾濁。造成標曲整體渾濁的原因是多種多樣的，但是今年我們又發(fā)現(xiàn)了一個更隱秘的影響因素，現(xiàn)分享給大家，希望大家能避免標曲整體渾濁，保證實驗順利進行。

想戰(zhàn)勝你的敵人，就要了解你的敵人。維生素的難點到底在哪兒呢？其實維生素項目的難點很多，還很細。追究其核心，主要是因為維生素的含量很低，低到非常容易受到其他因素的干擾。而且這些干擾因素，看不見，摸不著，一個不留神，我們就被偷襲了。結(jié)果就是這樣：

看到此圖時，大部分實驗員估計已經(jīng)心生絕望，幾天的辛苦又將付諸東流。所以大部人的反應(yīng)都是趕緊拿遠點，我再也不想多看它一眼。

但是，這是不對的呦！

我們應(yīng)該積極面對問題，盯著這個標曲，然后思考。它為啥這么渾濁呢？為啥沒有梯度呢？為啥標曲設(shè)定的時候要有接種空白和不接種空白呢？好了，你接近真相了！

但是，其實，捷徑就在眼前。我們?yōu)槭裁床蝗y測那套渾濁的標準試驗管呢？哪怕我們需要壓抑住自己內(nèi)心抗拒的波瀾。

一、如果我們測出來結(jié)果是這樣的（編撰數(shù)據(jù)）：

二、如果我們測出來結(jié)果是這樣的（編撰數(shù)據(jù)）：

那么可能的污染源是啥呢？前文提到了：所有玻璃器皿的潔凈度；槍頭或移液器的潔凈度；環(huán)境的潔凈度；標品配制的準確性及稀釋過程的準確性等等。不過，最近小編還發(fā)現(xiàn)了一個更隱秘的維生素污染源----接種液。

我們維生素試驗用到的接種液在接種前都是經(jīng)過特別處理后，去除菌液中殘存維生素的。比如葉酸通過“饑餓”培養(yǎng)6小時來清除菌液中殘存葉酸。泛酸、生物素和維生素B₁₂都是通過“離心-洗脫”三次來去除接種液中殘存維生素。但是，當我們操作不當時會造成接種液中殘存維生素含量遠遠超過方法的去除能力，導致接種液中帶入維生素，從而污染體系，導致維生素本底污染，干擾維生素測定。

比如：葉酸菌株活化時我們沒有使用標準要求的4mL葉酸測定培養(yǎng)基加2mL葉酸標準工作液，而選用了乳酸桿菌肉湯或MRS肉湯進行活化。那結(jié)局是很慘痛的，小編自己也深有體會。

再比如：生物素和維生素B₁₂菌株活化時使用的乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中的番茄汁配制不合規(guī)，那也會引起維生素本底的污染。最近小編就碰到了好幾個案例，由于維生素標準中未明確番茄汁的配制方法，所以不少實驗員就用了最直接的思路：番茄整個榨汁。這種番茄汁配制后濃度太高，維生素殘留量太大，超過了離心洗脫能處理的范圍，所以配制后的情況就如下圖所示。