? ?靛基質(zhì)試驗（indole test）是微生物檢驗的常用生化鑒定項目。反應(yīng)原理是：蛋白胨中的色氨酸被細菌產(chǎn)生的色氨酸酶水解，產(chǎn)生吲哚，在加入對二甲氨基苯甲醛試劑（靛基質(zhì)試劑）后，與之作用生成醌類結(jié)構(gòu)的玫瑰紅色物質(zhì)。
? ? ? ? 最近有很多小伙伴咨詢小編關(guān)于志賀氏菌檢驗中靛基質(zhì)試驗的問題。在GB 4789.5－2012《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》中，關(guān)于志賀氏菌的生化描述如下：
? 其中的靛基質(zhì)試驗除D群宋內(nèi)氏志賀氏菌為明確陰性結(jié)果外，其他志賀氏菌為多數(shù)陰性或者遲緩陽性，其中對于福氏志賀氏菌描述為遲緩陽性。
? ? ? ? GB 4789.5－2012《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》附錄Ａ中，對于試驗方法是這樣描述的：
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? ?靛基質(zhì)試驗，本來是挺簡單的一個生化鑒定項目，但是大多數(shù)小伙伴都會糾結(jié)：志賀氏菌這個靛基質(zhì)試驗究竟該培養(yǎng)多久？這個必要時，是什么意思？
?《伯杰細菌鑒定手冊》（第八版）中描述“福氏志賀氏菌血清型6不產(chǎn)生吲哚，另外一些血清型產(chǎn)生吲哚不穩(wěn)定”。
? ?因此大家對于“不穩(wěn)定”、“遲緩陽性”這些描述有以下疑慮：
? 1、是否多數(shù)福氏志賀氏菌都是遲緩陽性？
? 2、遲緩陽性需要培養(yǎng)多長時間會出現(xiàn)陽性反應(yīng)？
? 3、按照成品生化試劑培養(yǎng)時間進行培養(yǎng)是陽性還是陰性？
? 帶著這些問題，小編進行了相應(yīng)的驗證試驗，從試驗中尋找這些問題的答案。
? 我們使用不同菌種保藏中心的四株福氏志賀氏菌進行試驗。用平板上新鮮純化的菌苔制備0.5麥氏單位濁度菌懸液，每支生化管接種0.2 mL菌懸液（同時接種多管平行），36 ℃培養(yǎng)。每天觀察結(jié)果（觀察結(jié)果時，滴加靛基質(zhì)試劑1～2滴）。
? 試驗結(jié)果如下：
備注：1、“+”紅色；“-”淡黃色。2、CICC10865和CMCC(B)51572為同一菌株在不同菌種保藏中心的不同編號。
? ? ? ? ?試驗結(jié)果如下圖所示：
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36℃培養(yǎng)24 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)48 h
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36℃培養(yǎng)72 h? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?36℃培養(yǎng)4 d? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 36℃培養(yǎng)5 d??
? ? ? ? ?為了避免試劑原因造成結(jié)果偏差，我們同時使用國內(nèi)三個不同廠家的色氨酸肉湯（蛋白胨水）進行驗證，四株福氏志賀氏菌的試驗結(jié)果與上述結(jié)果一致。
? 根據(jù)試驗結(jié)果，現(xiàn)在我們回答最初的問題：
? 1、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗確實是遲緩陽性。
? 2、?福氏志賀氏菌靛基質(zhì)試驗遲緩陽性的培養(yǎng)時間需要48 h及以上。
? 3、?開展志賀氏菌靛基質(zhì)試驗，一般培養(yǎng)時間是18 h～24 h，不超過48 h。在這個時間范圍內(nèi)，福氏志賀氏菌一般都獲得陰性結(jié)果。
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? ? ? ? ?參考文獻：
? ?1、?GB 4789.5－2012《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》
? ?2、?《伯杰細菌鑒定手冊》（第八版）